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重庆邮电大学生物信息学院 微生物综合性实验开题报告 实验题目 苹果霉变所产生的菌种的分离与验证 实验人员 谢子义 王飞飞 万禹杰 张 霞 李 梅 陈小亭 填写时间: 2010 年 6 月 1 日 重庆邮电大学生物信息学院制 苹果霉变所产生的菌种的分离与验证 一、立题依据 引起苹果腐烂最多的是酵母菌，其次是真菌（霉菌） 　　细菌是一类具有细胞壁的、单细胞的原核细胞型微生物。各种菌细胞，在一定的环境条件下，有相对恒定的形态和结构。通过了解细菌的形态结构，对于细菌的鉴定，疾病的诊断治疗均有重要意义。 　　细菌的个体形态有杆状、球状或弧状。芽孢杆菌属的细菌呈杆状或圆柱状，大小为1～5微米×0.2～1.2微米，当做成水装片时，经特殊染色，可观察到鞭毛。当环境不良时，能在体内形成一个圆形或椭圆形的芽孢。芽孢外被厚壁，抗逆性强，尤其是对高温有非常强的忍耐力，一般在100℃下，3小时仍不丧失其生活力，革兰氏染色呈阳性反应。假单孢属的细菌，细胞形状差异很大，通常呈杆状或球形，大小为0.4～0.5微米×1.0～1.7微米，典型的细胞在一端或两端具有1条或多条鞭毛，形成白色菌落，有的种能产生荧光色素或其它色素，革兰氏染色呈阴性反应(图11-6)。黄色单孢菌仅具一根端生鞭毛，菌落黄色粘质状，革兰氏染色呈阴性反应。 细菌的基本形态有球形、杆状和螺形三种。通过革兰氏染色法，可以鉴别细菌的形态、大小、排列和染色性。 　　细菌的特殊结构有芽孢、荚膜和鞭毛和菌毛等，其中菌毛只有在电子显微镜下才能观察到，其余三种的显微镜检查必须用特殊染色方法，才能获得良好的效果。 　　细菌的芽孢具有厚而致密的壁不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色(芽孢呈无色透明状)。芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦染上后又难以脱色这一特点而设计的。所有的芽孢染色法都基于同一个原则：除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽孢着色，再使菌体脱色，而芽孢上的染料则难以渗出，故仍保留原有的颜色，然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察. 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，每种酵母细胞有一定的形态大小，大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；酵母细胞核与细胞质有明显的分化，个体直径比细菌大几倍到十几倍。 　　菌落特征：较大而厚，湿润、较光滑，颜色较单调（多为乳白色，少有红色，偶见黑色）。 　　美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色。 二、研究内容 2.1研究目标 苹果霉变菌种分离试验主要的目标是通过微生物菌种分离试验，分离出苹果霉变后霉变处所含有的各种细菌，通过其形态确定其名称。此外我们也可将此技术扩展到苹果霉变的防治领域创造可观的经济价值。 2.2研究内容 本实验的研究内容是通过微生物实验的方法接种可能引起苹果霉变的细菌，通过培养观察，分离细菌，对其进行生化鉴定，理化鉴定，显微鉴定，逐渐确定致病细菌,同时将疑似治病细菌反接种在健康的苹果上进行观察，观察该苹果是否霉变。 2.3拟遇见的问题 在本次实验中我们可能遇到的问题如下： 2.3.1.培养基的配置： 培养基（Medium）是供、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素。 培养基由于配制的原料不同，使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基（如组织培养基），较长时间的贮存，必须放在2~6的冰箱内。由于液体培养基不易长期保管，现在均改制成粉末。靛基质试验某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物。硝酸盐胨水亚硝酸盐在酸性条件下与a萘胺和对氨基苯磺酸发生重氮反应，生成红色的1-萘-4偶氮苯对磺酸硝酸盐：硝酸盐35℃培养24小时，甲液a-萘5克溶于5醋酸100中乙液对氨基苯磺酸8克溶于5醋酸100 按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L Na