第二章 酶的分类和反应_.ppt

具有酯酶活性的蛋白酶 胰凝乳蛋白酶 枯草杆菌蛋白酶 3青霉素酰化酶 4 米曲霉蛋白酶 用于具有空间位阻酯类化合物的水解 脂肪酶 脂肪酶在动物、植物及微生物中都存在，能催化 甘油三酯水解为脂肪酸和甘油，它们在食品和油脂 加工、日用化学品及手性中间体的制备中有着广泛的 应用。 在生物催化反应中，有30%以上的研究涉及到脂肪酶。 脂肪酶催化反应的分子机理与蛋白酶和酯酶不同。 酯酶催化反应符合米氏方程，而脂肪酶表现为S曲线 脂肪酶活性中心外部有一个两性?-螺旋片断，像 一个盖子 脂肪酶对Ⅰ型酯和Ⅱ型酯都有很高的立体选择性 3 为了保证脂肪酶的催化活性，Ⅰ型酯的醇基部分应该 是长链，如正丁醇； Ⅱ型酯的酰基部分应为长链， 至少含3-4个碳原子 不同来源的脂肪酶，立体选择性不同 曲霉属脂肪酶能将分子大的酯作为底物，对小分子酯表现出 低的选择性；假丝酵母脂肪酶则处于二者之间；假单胞菌属和 毛霉属脂肪酶只能将空间位阻小的酯作为底物;纯PPL的立体选择 性与假单胞菌属类似 5 细菌和真菌能产生胞外脂肪酶，便于大量生产 猪胰腺脂肪酶（porcine pancreatic lipase, PPL） PPL廉价且应用广泛。它的粗制剂中含有多种 水解酶如PPL、?-胰凝乳蛋白酶、胆固醇酯酶、羧肽 酶等，这些水解酶的立体选择性各不相同，互相有干 扰，因此有时对底物的立体选择性不高。 底物结构(R) 溶剂 产物构型（e.e.%） Ph 甲苯 S（99） PhCH2O- 异丙醚 R（94） 产物一般为S构型，选择性（e.e%）与R的空间效应及 电荷效应有关 乙醚萃取很容易分离产物 2 烯丙醇的还原 面包酵母 面包酵母能将上述化合物中与芳香环共轭的C=C双键 还原，而其他双键不还原 3 ?，?-不饱和酮的还原 酮的还原遵循 Preg 规则 面包酵母 快 面包酵母 主 主 次 2.7 转移酶（transferase, EC 2.x.x.x） 转移酶催化功能团从一个底物转移给另一个 底物。它们的底物必须有两个，一个是供体， 一个是受体。转移的基团可以是氨基、糖基、 或一条多糖链、磷酸基。如转氨酶、糖基转移 酶、磷酸化酶等。 X-Y + Z X+ Z-Y 氨基转移酶 氨基转移酶以磷酸吡哆醛（PLP）为辅酶， 催化下列反应，反应中氨基酸将分子中的氨 基转移给?-酮酸，生成新的?-氨基酸和?-酮酸 氨基转移酶 氨基酸可用于食品添加剂、医药及输液中 氨基酸转移酶种类多、分布广，能催化L-氨基酸的生物合成，例如：L-苯丙氨酸由苯丙酮酸与L-天冬氨酸在L-天冬氨酸转氨酶的催化作用下生成，生产规模可以达到600 吨/年。 L-氨基酸还可以通过发酵的方法生产，但D-氨基酸 不能通过发酵的方法生产，产率及光学纯度都不高 应用化学方法合成D-氨基酸成本高，较困难 氨基酸的生产方法有四种：从生物资源物质中提 取；化学法；发酵法；酶法 下图给出了以D-氨基酸为氨基供体工业规模 合成新D-氨基酸的示意图，产品规模达到多吨 级以上 目前可利用D-氨基转移酶能催化D-氨基酸的合成。 D-氨基酸如D-对羟苯甘氨酸是合成β-内酰胺药 物的重要原料，D-氨基酸还是农药和食品添加剂的 重要组成成分 芽孢杆菌中的 D-天冬氨酸转氨酶 D-氨基酸的合成 缺点 ：平衡转化率只有约50% 下图给出了以L-天冬氨酸作为氨基供体，通过 偶联酶系统来进行D-氨基酸生产的流程图 该工艺的优点是可以使用克隆的E.coli菌株，它 可以进行所有步骤反应，利用廉价消旋底物高效生 产D-氨基酸。 L-天冬氨酸在L-天冬氨酸转氨酶的作用下，脱掉 氨基变成β-酮戊二酸，它可进一步脱羧变为丙酮酸。 丙酮酸可以参加转氨反应，生成丙氨酸，但在乙酰乳酸合酶的催化下，丙酮酸发生二聚反应生成乙酰乳酸，它自发脱羧生成乙酰甲基丙醇，不再生产氨基酸。 环糊精糖基转移酶 1) 1 反应条件 【1】 8.3% 可溶性淀粉 pH 5.8-6.0 温度 55℃ 介质 水 反应类型 己糖基转移反应 催化剂