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白色链霉菌发酵生产ε—聚赖氨酸工艺优化 　　摘要：采用白色链霉菌N31-69菌株发酵制备ε-聚赖氨酸，考察碳源、氮源等因素对ε-聚赖氨酸产量的影响，优化发酵培养基。结果表明，优化的培养基为葡萄糖、（NH4）2SO4和酵母浸出粉的浓度分别为30、7、7 g/L，ε-聚赖氨酸摇瓶发酵产量达1.519 g/L，比优化前的产量提高了28.0%。进一步对N31-69菌株在5 L发酵罐内的发酵工艺进行优化，发现发酵48 h后采用流加补糖方式控制还原糖浓度为10～15 g/L，从72 h开始控制pH为4.3，发酵168 h后ε-聚赖氨酸的产量可达15.60 g/L。 关键词：白色链霉菌（Streptomyces albus）；ε-聚赖氨酸；培养基；发酵工艺 中图分类号：TS202.3 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）15-3635-04 ε-聚赖氨酸由25～30个赖氨酸残基聚合而成，有很强的抑菌能力[1]，被FDA批准为安全的天然生物防腐剂，具有巨大的商业潜力[2]。日本窒素公司已实现ε-聚赖氨酸微生物发酵的工业化生产，发酵罐产量达48.30 g/L[3，4]。而国内ε-聚赖氨酸的研究还处于实验室水平，发酵产量与国外差距很大。刘长江等[5]优化了发酵培养基和培养条件，ε-聚赖氨酸摇瓶产量为1.50 g/L；陈玮玮等[6]对北里孢菌Kitasatospora MY5-36发酵产ε-聚赖氨酸的条件进行优化，摇瓶发酵产量达1.17 g/L，在5 L发酵罐内批式发酵产量达7.72 g/L；黄国昌等[7]在50 L自控式发酵罐中对ε-聚赖氨酸的发酵条件进行研究，发酵产量最高达7.36 g/L。本研究采用白色链霉菌（Streptomyces albus）N31-16菌株发酵制备ε-聚赖氨酸，考察碳源、氮源、无机盐等因素对发酵的影响，以提高ε-聚赖氨酸产量，为促进ε-聚赖氨酸的工业化生产提供依据。 1 材料与方法 1.1 菌种来源 白色链霉菌N31-16菌株，赣南医学院微生物实验室筛选保藏[8]。 1.2 白色链霉菌发酵生产ε-聚赖氨酸流程 1.2.1 斜面培养 斜面培养基包括酵母浸出粉 4 g/L、麦芽浸出粉 10 g/L、葡萄糖 4 g/L，pH 7.3。接种环取一环平板上单菌落的孢子至斜面，置于30 ℃培养箱中培养4～6 d。 1.2.2 摇瓶种子培养 摇瓶种子培养基为M3G[9]，含有葡萄糖50 g/L、（NH4）2SO4 10 g/L、K2HPO4 0.8 g/L、KH2PO4 1.36 g/L、MgSO4·7H2O 0.5 g/L、ZnSO4·7H2O 0.04 g/L、FeSO4·7H2O 0.03 g/L、酵母浸出粉5 g/L，pH 6.8，装液量为250 mL的三角瓶中装20 mL培养基。接种环取一环斜面孢子，接入种子培养基，在30 ℃、摇床转速220 r/min的条件下培养1 d。 1.2.3 摇瓶发酵培养 摇瓶发酵培养基以M3G培养基为基础，添加不同的碳源、氮源和无机盐，考察其对菌体生长和ε-聚赖氨酸产量的影响，接种量为5%（占发酵液体积比，下同），其他培养条件同摇瓶种子培养。考察某一影响因素时保持其他培养基成分不变，以M3G培养基为对照，其ε-聚赖氨酸相对产量为100%，每处理设置3组平行试验。 1.2.4 发酵罐发酵工艺的优化 接种量3%，加入优化后的发酵培养基，发酵温度30 ℃，转速200～700 r/min，通气速率2～5 m3/min。分别采用3种工艺进行发酵，比较各种工艺对菌体生长和ε-聚赖氨酸产量的影响。①工艺一：发酵液中还原糖浓度降至15 g/L以下后，每隔24 h间歇补糖至25 g/L，pH降至4.3后用氨水控制pH维持在4.3。②工艺二：还原糖浓度降至15 g/L以下后，用流加补糖方式控制发酵液中还原糖浓度为15～20 g/L，pH降至4.3后用氨水控制pH维持在4.3。③工艺三：还原糖浓度降至15 g/L以下后，采用流加补糖方式控制还原糖浓度为10～15 g/L，72 h后用氨水控制pH维持在4.3。 1.2.5 指标测定 ①干重。发酵结束后将发酵液于12 000 r/min离心3 min，弃上清，沉淀洗涤3次，108 ℃下干燥至恒重后称重。②菌体浓度（Packed Mass Volume， PMV）。取10 mL发酵液于4 000 r/min离心10 min，测定上清液体积。PMV=（发酵液总体积-上清液总体积）/发酵液总体积×100%。③残糖含量。采用斐林试剂法测定发酵液中残糖含量。④ε-聚赖氨酸含量。采用优化后的Itzhaki法[4]测定发酵液中ε-聚赖氨酸含量。 2 结果与分析 2.1 摇瓶发酵培