从苹果属腊叶标本中提取DNA的改良CTAB法研究-中国农学通报.PDF

中国农学通报 2012,28(16): 176-179 Chinese Agricultural Science Bulletin 从苹果属腊叶标本中提取DNA的改良CTAB法研究 1 2 1 2 2 丁芳兵 ，刘连芬 ，汤庚国 ，吴瑞姣 ，钱关泽 1 2 （南京林业大学森林资源与保护学院，南京210037 ；聊城大学生命科学学院，山东聊城252059 ） 摘 要：为了探求从保存年代较长，并富含多糖多酚的苹果属植物腊叶标本中提取基因组DNA 的方法， 在传统CTAB 法的基础上加以改良，无液氮研磨材料后加入预冷CTAB free 缓冲液和提高沉淀时盐浓 度，所得模板直接用于扩增nrITS 区和cpDNA matK 基因。经紫外分光光度和琼脂糖凝胶电泳检测，结 果表明用改良方法提取的DNA 在质量和产量上优于常规方法并能满足后续扩增反应的要求。该方法 不需要液氮研磨，节省了人力和成本，提前加入除杂缓冲液对去除多酚的效果良好，增加沉淀时盐的浓 度能有效去除多糖，表明改良CTAB 法适合苹果属腊叶标本叶片总DNA 的提取。 关键词：DNA 提取；多酚；多糖；苹果属；腊叶标本 中图分类号：Q946.2 文献标志码：A 论文编号：2012-0279 DNAExtractionfromMalusLeavesofDriedSpecimens BasedontheModifiedMethodsofCTAB 1 2 1 2 2 Ding Fangbing , Liu Lianfen , Tang Gengguo , Wu Ruijiao , Qian Guanze 1 ( CollegeofForestResourcesandEnvironment,NanjingForestyUniversity, Nanjing 210037; 2LifeScienceCollegeofLiaochengUniversity, Liaocheng Shandong 252059) Abstract:In order to find methods for total DNA extraction from Malus herbarium specimens stored for many years and enriching polysaccharides and polyphenolics, modified CTAB methods were studied based on the conventional methods. The DNA templates were used directly in amplifying the whole nrITS region and cpDNA matK gene by adding precooling CTAB free buffer after treated without liquid nitrogen and improving the concentration of NaCl when precipitating. Utraviolet spectrophotometer and agarose gel electro