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激活态雪旺细胞对神经干细胞分化作用探究 　　哈尔滨医科大学附属第四医院骨科，黑龙江哈尔滨 150086 [摘要] 目的 探讨激活态雪旺细胞（SCs）对神经干细胞（NSCs）的分化作用。 方法 取出生24 h内的SD乳鼠脊髓NSCs，分离培养并传至4代。取体重（100±5）g的SD大鼠，结扎右侧坐骨神经，1周后取双侧坐骨神经，左侧提取正常坐骨神经分离培养SCs（普通SCs），右侧提取结扎变性的坐骨神经分离培养SCs（激活态SCs），均采用双酶消化加差速贴壁法。将SCs与NSCs应用Transwell培养皿联合培养，分为三组：A组为激活态SCs与NSCs；B组为普通SCs与NSCs；C组仅为NSCs。于培养的第2、4、6天检测各组NSCs活性。1周后，Western blot检测各组SCs表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的表达水平，免疫荧光检测各组NSCs分化比例。 结果 传至4代的NSCs生长稳定，分离的SCs 7 d后大量增殖呈旋涡状。联合培养后MTT法检测细胞活性，第2、4天三组细胞的活性差异无统计学意义（P 0.05），第6天C组活细胞比例开始降低，A、B组与C组比较差异有统计学意义（P 0.05）。Western blot检测A组细胞表皮生长因子（EGF）表达水平（0.486±0.028）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）表达水平（0.385±0.023）均高于B组，差异有统计学意义（P 0.05） according to the MTT detection. However， the cytoactive began to reduce at the sixth day by MTT detection， and the cytoactive of group A and group B were superior than those of group C， the differences were statistically significant （P 0.05）. The expression of EGF and bFGF in group A [（0.486±0.028）， （0.385±0.023）] were both higher than those in group B， the differences were statistically significant （P 　　[Key words] Schwann cell； Neural stem cell； Cell differentiation； Co-culture； Neuron [基金项目] 黑龙江省自然科学基金项目（编号D200901）；黑龙江省教育厅科技研究项目（编。 [作者简介] 张睿（1987.2-），男，哈尔滨医科大学2011级在读硕士研究生；研究方向：神经干细胞应用。 [通讯作者] 赵承斌（1958.5-），男，主任医师，教授，硕士研究生导师；研究方向：脊柱外科。 周围神经损伤是骨科常见的疾病之一，虽然周围神经具有一定的再生能力，但对于较大缺损却很难自身修复[1]。随着组织工程学领域研究的深入，神经干细胞（NSCs）已被公认为是对神经损伤修复的有效方法，通过NSCs在神经断端的不断分化，使受损的周围神经重新恢复连接。然而单纯形态学得连接不能保证神经的传导功能，有研究表明，这与NSCs分化过程中分化为胶质细胞和神经元的比例有关[2]，提高神经元的分化比例，降低胶质细胞的表达可有效提高神经的传导速度，因此许多学者通过不同方法促进神经干细胞向神经元的分化[3-5]，均取得了一定进展。本研究通过激活态雪旺细胞（SCs）刺激NSCs的分化，观察其诱导NSCs分化为神经元的能力。 1 材料与方法 1.1 实验材料 雌性SD大鼠[中国农科院哈尔滨兽医研究所提供，许可证号：SYXK（黑）2006-032]；DMEM/F12细胞培养基（Hyclone公司，美国）；青-链双抗，胰蛋白酶，Ⅱ型胶原酶（碧云天，中国）；兔抗鼠单克隆抗体Nestin，FITC标记的羊抗兔IgG，兔抗鼠碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、表皮细胞生长因子（EGF）单克隆抗体，兔抗鼠MAP-2、GFAP单克隆抗体（武汉博士德公司）；Transwell培养皿（Corning公司，美国）。 1.2 实验方法 1.2.1 神经干细胞的分离培养与鉴定 取出生24 h内的SD大鼠，断髓处死后无菌条件下取出脊髓，显微镜下剥离硬脊膜，剪成5 mm3组织块，加入0.25%胰酶消化10 min，用吸管反复吹打至单细胞悬液，加入5 mL DMEM/F12培养基终止消化。