细胞周期抑制因子p19arf对人二倍体细胞衰老的影响-中国科学.pdfVIP

中国科学 C 辑:生命科学 2007 年 第 37 卷 第 1 期: 15~19 SCIENCE IN CHINA PRESS 细胞周期抑制因子p19ARF 对人 二倍体细胞衰老的影响 * 白雪源 陈香美 侯 剀 张 萍 冯 哲 傅 博 ( 中国人民解放军总医院 军医进修学院 全军肾脏病研究所, 北京 100853) 摘要 为了探讨细胞周期抑制因子 p19ARF 对人二倍体细胞复制性衰老的影响, 构建了重组 p19ARF 真核表达载体, 并通过脂质体的介导将p19ARF 基因转染到人二倍体成纤维细胞 WI-38 中过表达, 观察其对WI-38 细胞衰老的影响. 结果发现与对照细胞相比, 在p19ARF 基因导入后, 细胞中p53 和p21 的表达水平明显上调, 细胞传代数减少 10~12 代, 生长速率降低, 细胞周期阻 滞于G1 期, 衰老标志物SA-β-gal 染色阳性率上升, 线粒体膜电位下降, 细胞形态呈衰老细胞样变 化, 这些结果表明p19ARF 高表达可促进人二倍体细胞的衰老进程. 关键词 p19ARF 细胞衰老 二倍体细胞 细胞周期 抑癌基因 目前我国已经进入老龄化社会, 对衰老与老年 但近年研究发现它在细胞衰老过程中也发挥着重要 [3~5] 疾病的防治已成为国家与社会的重大需求, 因此阐 的作用, 是细胞复制性衰老的关键效应基因 . 明衰老的细胞分子机理具有重要的理论意义和临床 p19ARF 也是一种抑癌基因, 我们以前的研究已经显 意义. 衰老是由遗传因素与环境因素共同作用的结 示其可抑制肿瘤细胞的增殖 [6], 那么p19ARF 是否也 果. 人类多数细胞不具有无限分裂的能力, 体外培养 与细胞的衰老有关？并不很清楚. 在本研究中我们 的正常细胞在分裂到一定次数( 即群体倍增次数, 应用基因转染技术将p19ARF 基因导入人二倍体成纤 population doublings, PD) 时即丧失增殖能力而出现永 维细胞WI-38 中, 观察了p19ARF 对细胞衰老的影响 及其诱导衰老发生的可能机制. 久性生长停滞现象, 同时伴有一些细胞形态的特征 性改变, 这个过程即是细胞复制性衰老. 1 材料与方法 INK4a/ARF基因座位于人 9 号染色体p21 区, 除 1.1 细胞培养 编码细胞周期蛋白依赖性激酶 4/6(cyclin-dependent WI-38 细胞为人二倍体成纤维细胞, 购自美国 kinase 4/6, CDK4/6) 的特异性抑制因子p16INK4a蛋白 ATCC 公司, 培养于含丙酮酸钠 0.9 mmol/L, 10%胎牛 外, 还通过选择性转录起始机制编码出与p16INK4a 血清的 MEM 培养液(GIBCO 公司) 中.