内耳相关基础研究专辑-中华耳科学杂志journalofotology.pdfVIP

· · Chinese Journal of Otology Vol. 9, No.3, 2011 258 ·内耳相关基础研究专辑· 基于聚酰胺胺的非病毒载体携带Math1 基因进行体 外基因转导的有效性和安全性评价 ， 1 1 3 2 1 1 2 1 1 吴南 陈志婷 李敏 刘会占 任丽丽 吴雁 杨伟炎 杨仕明 1 解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科医院 解放军耳鼻咽喉研究所 （北京 100853） 2 国家纳米科学中心（北京 100190） 3 兰州大学第一医院耳鼻咽喉头颈外科 （兰州 730001 ） 【摘要】 目的 研发一种可用于携带 Math1 基因进行基因转导的基于聚酰胺胺树枝状聚合物（PAMAM Den- drimers ， PAMAM ） 的非病毒载体， 对其转导效率和安全性进行评价， 为进一步在体基因治疗奠定必要的实验基础 和理论依据。 方法 PAMAM （7 代）通过加热活化和环糊精（Cyclodextrin ， CD ）表面修饰后， 与pRK5-Math1-EGFP 质粒在不同氮磷比（ ） 的情况下， 浮配形成基因 载体复合物， 在无血清培养条件下， 对 细胞系进行 N／ P - HEK-293T 体外基因转导， 对其转导效率和安全性进行评价。 加热活化温度设定为 60℃ ， 时间分别为： 0 、 6 、 12、 24 、 48 小 时； 聚酰胺胺树枝状聚合物 环糊精质量比（ ） 分别为： （ ， ， ， 和无 ）； 分别为： / PAMAM／ CD 1／ 2 1／ 1 4／ 1 8／ 1 CD N／ P 1／ 1， 2／ 1， 5／ 1 和 10／ 1。 通过荧光倒置显微镜观察EGFP 阳性细胞并计算百分比的方法评价基因转导有效率， 通过标 准 实验评价其安全性。 结果 通过 加热活化 小时、 质量比为 进行环糊精表面修饰后获得的基于 MTT 60℃ 24 1／ 1 PAMAM 的非病毒基因载体， 携带pRK5-Math1-EGFP 质粒进行基因转导的效率最高， 达到38.14 ± 2.85 % ， 同时其 细胞存活率达到 68.86 ± 3.44 % 。 结论 我们获得了一种基于PAMAM 的非病毒基因载体， 可高效、 安全地携带 Math1 进行基因转导， 为其下一步进行在体基因转导研究奠定了必要的实验基础， 有望未来应用于临床的聋病基 因治疗。 【关键词】 基因转导； 聚酰胺胺树枝状聚合物； Math1 ； 活化； 环糊精修饰 【中图分类号】