使用QuEChERS EN方法对小白菜中残留农药LC-MS-MS 研究.docVIP

使用QuEChERS EN方法对小白菜中残留农药LC/MS/MS 研究 　　摘 要：使用安捷伦试剂盒应用QuEChERS EN方法进行样品制备，此方法方便快捷、清洁高效、安全耐用，可用于小白菜中5种具代表性的不同种类残留农药的萃取和净化。小白菜中含有大量叶绿素，基质中色素含量很高。使用安捷伦针对高色素瓜果蔬菜的EN分散固相萃取试剂盒（添加了石墨化碳黑（GCB） 的乙腈萃取剂），测定了方法的回收率和精密度，分析了基质干扰的处理方法。实验结果所得定量结果可以接受，得出小白菜中农药的定量限为5 ug/kg，平均回收率为87.2%，平均相对标准偏差为5.0%。 关键词：小白菜；QuEChERS EN；农药残留；LC/MS/MS 传统的样品处理技术经历了液固萃取、液液萃取、固相萃取几个阶段。在2003年，根据这些萃取的经验，美国化学家发明了一种可以有效分离蔬菜水果中农药残留的方法。配合液质、气质的高灵敏性、选择性，QuEChERS技术凭借着快捷、简便、低成本、高效、稳定和安全的特点得到了长足的发展。QuEChERS EN 15662方法被广泛地用于食品中的农药分析，特别是在欧洲，该方法采用乙腈作萃取剂，然后用氯化钠、无水硫酸镁和柠檬酸盐缓冲液从样品中的盐析出水来诱导液——液分层。为了净化样品，结合分散固相萃取方法，萃取管中的乙二胺-N-丙基硅烷PSA可以除去脂肪酸及其它组分，无水硫酸镁进一步干燥，吸收萃取物中的残留水。根据不同的食物基质，该步骤中可能会增加其它成分，如用于除去色素和甾醇的石墨化炭黑（GCB），或者用于除去更多类脂和脂肪油的C18 等。由于小白菜中含有高浓度的叶绿素，因此，本试验选用适用于含高色素量的添加了GCB的EN 分散固相萃取试剂盒，对于净化色素基质如小白菜是非常有帮助的。表1 为小白菜中各种农药的化学和法规信息。 表1 农药的化学和法规信息 1 材料与方法 1.1 仪器设备，材料与试剂 赛多利斯 MXX-601天平，飞利浦多功能食品粉碎机，CentraCL3R 离心机，Eppendorf 小型高速离心机， Agilent 1200 系列高效液相色谱系统配置电喷雾离子源的Agilent 6410 三重串联四级杆LC/MS 系统， 1.2 实验材料 安捷伦 Bond Elut QuEChERS EN 萃取试剂盒，和用于高色素水果和蔬菜的Bond Elut QuEChERS EN 分散固相萃取试剂盒。 1.3 药品与溶剂配制 甲醇、甲苯、乙腈、二甲基亚砜、冰醋酸、甲酸，农药标准品、内标物（磷酸三苯酯 TPP），以上试剂和溶剂均为高效液相纯级或分析纯级。 pH值=5 的1 mol/L 醋酸铵原液，并于4 ℃保存。CH3OH/H2O=20：80、pH值=5 的5 m mol/L 醋酸铵溶液。向1L 乙腈中加入5mLpH=5 的1 mol/L醋酸铵原液，均匀混合后超声5min，即得5m mol/L 醋酸铵乙腈溶液。1% 甲酸的乙腈溶液。 标准品和内标物（IS）储备液（除多菌灵为0.5 mg/ mL 外，其余均为2.0 mg/mL） 分别用甲醇，含0.1 %甲酸溶液的乙腈或二甲基亚砜配制，于-20℃下低温储存。1、5、20 μg/mL 的3种质控加标溶液以乙腈和含0.1%的甲酸溶液的水1：1 混合作基质，现配现用。制备10 μg/mL 标准品的乙腈/水（含0.1% FA）=1：1 的加标溶液，并通过适当稀释，用于获得空白基质加标标准曲线。用含0.1% 甲酸溶液的1：1 乙腈/H2O 为溶剂，制备15 μg/mL 的TPP 加标溶液。 2 样品前处理 样品制备过程包括样品粉碎，萃取/分离和分散固相萃取净化等步骤。首先将小白菜擦去泥土，取可食部分切碎，用食品粉碎机打浆，称取0.01kg经匀浆均匀的的样品放入50 ml离心管中。质控加标可先通过适当的加标溶液（100 μL） 对样品进行加标，然后加入66.7μL IS 加标溶液（15 μg/mL 的TPP）。每个离心管中加10 mL乙腈，盖紧样品管盖，振摇1分钟。再加入试剂盒附带的萃取盐包和化学粉末包（4g无水硫酸镁、1g氯化钠、1g柠檬酸钠），0.5g柠檬酸钠半水化合物。拧紧盖子，再用力振摇1分钟，用离心机5000转/分离心3分钟。抽取1mL上清液转移至2mL安捷伦分散型固相萃取管中，盖好盖子，用力摇1 分钟。将2mL 管放入小型高速离心机中13000转/分离心2分钟，取200μL等份的萃取液转移到进样瓶中，马上加入10μL 1% 甲酸的乙腈溶液。再加入800 μL 水或者适量的标准品溶液制备成水溶液。拧紧样品瓶盖，涡旋混匀，以备LC/MS/MS 分析。 3 仪器条件 液相色谱条