聚合酶链式反应（PCR）概述.ppt

2、荧光PCR的方法 （1）插入染料法 （2）杂交探针法 TaqMan 探针 分子信标探针（Molecular Beacons） FRET探针 5’ 5’ 3’ 3’ d.NTPs Taq酶 Primers 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 反应组分 变 性 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 插入染料方法的原理 插入染料 Taq ID l 延 伸 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 检测激发的荧光 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 5’ Taq Taq 3’ 5’ 3’ Taq Taq 5’ 5’ 退 火 ID ID ID ID ID ID ID ID ID ID l l l l l SYBR Green 激发波长495nm，检测波长520nm。 SYBRGreen染料插入双链DNA，检测灵敏度提高200倍。 相对杂交探针方法，插入染料法相对较便宜。 和杂交探针方法相比，插入染料法特异性低 。 最常用的插入染料 TaqMan探针 5’ 5’ 3’ 3’ d.NTPs Taq酶 Primers 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 反应体系 变 性 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’