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天葱花序轴再生体系探究 　　摘要：以天葱（Allium chrysanthum Regel.）花序轴为外植体，研究不同激素组成及其浓度对天葱花序轴愈伤组织诱导、继代培养和芽分化的影响，以筛选适合天葱花序轴再生的最适培养基。结果表明，以花序轴为外植体的最适愈伤诱导培养基为 MS+2.0 mg/L 2，4-D +0.1 mg/L 6-BA；最适愈伤继代培养基为 MS+2.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA；最适愈伤芽分化培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA。 关键词：天葱（Allium chrysanthum Regel.）；花序轴；离体培养 中图分类号：S633；Q813.1+2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）23-5906-03 天葱（Allium chrysanthum Regel.）属百合科葱属多年生草本植物。分布于湖北、西藏、云南、四川、陕西、青海、甘肃、山西等地，生长在海拔2 000～ 3 000 m的山坡草地或山脊草丛中。鳞茎及幼苗均可作蔬菜食用，其葱香味浓郁，口感甚佳。由于大量采挖，野生天葱资源数量急剧减少，其资源保护和合理开发利用日趋紧迫。用组织快繁的方式既能保持野生天葱的原有种性，又能在短时间内繁殖大量天葱幼苗，对其种质资源保护和开发利用有重要的意义。目前，天葱的组培快繁工作尚未见报道，本研究从天葱愈伤组织诱导、继代培养、芽分化等方面研究了天葱的组培快繁，以期为天葱的种质资源保护和开发利用提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 试验材料 2010年3月上旬从五峰县采集天葱种植在湖北省农业科学院蔬菜科学研究所武昌南湖试验基地，常规管理。4月中旬天葱开始抽薹。 1.2 方法 1.2.1 无菌外植体的构建 当天葱花薹抽出5～7 d时，于睛天上午10：00左右采摘未开放的嫩花薹。取回后将花薹于6 ℃放置1 d，然后在超净工作台上剪取花薹花序轴苞段，用75%乙醇表面消毒灭菌30 s，再用0.1%升汞浸泡10 min，无菌水冲洗3次，剥去外层苞叶，在花序轴顶部横切，去除花茎部分，将花序轴接种到不同处理的花序轴愈伤诱导培养基上培养，培养温度为（25±2） ℃，光照 14 h/d，光照度为2 500～3 000 lx。 1.2.2 天葱花序轴愈伤诱导培养基及其继代培养基的筛选 将消毒后的天葱花序轴接种于含不同激素配比的13种MS培养基上进行愈伤组织诱导培养，培养温度25 ℃，具体激素配比见表1。培养15 d后统计出愈率；然后将长出的愈伤组织分成小块接种于含不同激素配比的5种愈伤继代培养基上，具体激素配比见表2，统计愈伤组织继代培养情况，以愈伤组织能在15 d内有明显生长为继代培养成功。愈伤诱导培养基及其继代培养基的基本成分为：MS、3%蔗糖、8 g/L琼脂，pH 6.0。 1.2.3 天葱花序轴愈伤芽分化培养基的筛选 采用4种天葱花序轴愈伤芽分化培养基对其进行培养，以筛选出最佳愈伤芽分化培养基，其具体配方见表3。 2 结果与分析 2.1 天葱花序轴愈伤组织的诱导 13种MS培养基上接种天葱花序轴，对其进行愈伤组织的诱导，在12号培养基上诱导出的愈伤组织最好，从出愈伤数和质量综合考虑，12号培养基是最佳的愈伤诱导培养基，8号培养基次之（表4、图1a）。从表4可以看出，KT对天葱花序轴的愈伤诱导不利，2，4-D对其愈伤诱导有促进作用。 2.2 天葱花序轴愈伤组织的继代培养 在天葱花序轴愈伤组织的继代培养中，4号（MS+2.0 mg/L NAA +1.0 mg/L 6-BA）培养基的继代培养成功率最高，达到80.0%，为天葱花序轴最适愈伤继代培养基（表5）。 2.3 天葱花序轴愈伤组织的芽分化 天葱花序轴继代培养中出现紧密型愈伤组织时，进行芽的诱导分化，将愈伤组织转到4种不同激素配比的分化培养基上，在25 ℃ 2 000 lx光照条件下培养。7 d后出现淡绿色芽点，15 d时有丛生芽形成。如表6所示，在不加任何激素的4号培养基上，虽然也有16.7%的芽分化率，但分化的芽数量很少，平均每块愈伤组织上仅有0.3个芽。2号分化培养基的芽分化率达96.7%，分化芽的数量也是最高的，每块愈伤组织上平均有3.6个芽。这表明2号分化培养基（MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA）对天葱花序轴诱导芽的分化是最适宜的（图1b）。 利用最适分化培养基进行培养，得到的天葱试管苗如图1c所示，将试管苗移栽至田间，生长良好（图1d） 3 小结与讨论 在植物组织培养中，以花序轴为外植体的研究较多[1-6]，但在葱蒜类蔬菜中，仅发现熊正琴等[4