微生物细菌感染的检查方法与防治原则.ppt

特殊染色法 细胞壁染色法 荚膜染色法 芽胞染色法 鞭毛染色法 异染颗粒染色法 吲哚试验 * * 海南医学院 病原生物学教研室 饶朗毓 2011本科 目的要求 掌握：病原菌的常规分离与鉴定方法原则；疫苗的概念；死疫苗和活疫苗的概念及区别；类毒素的概念和特点；人工主 动免疫和人工被动免疫的比较。 熟悉：细菌形态学检查的方法；血清学诊断的方法。 了解：细菌的免疫学诊断技术；亚单位疫苗和DNA疫苗。 感染性疾病的诊断 微生物学诊断 样本采集与送检原则 检验程序 血清学诊断 原则：采取急性期和恢复期双份血清，后者的抗体效价比前者升高≥4倍者有意义。 检测病原菌及其抗原、产物或核酸 检测患者血清中的特异性抗体 一.细菌标本采集与送检原则 采集合适的标本 严格无菌操作 正确采集标本 正确标记及包装 正确运输及保存 二、致病菌的检验程序 形态学检查 分离培养 生化试验 血清学试验 动物实验 药敏试验 快速检测方法 初步诊断 明确诊断 （一）细菌的形态学检查 几种常用的显微镜： 普通光学显微镜 暗视野显微镜 相差显微镜 荧光显微镜 电子显微镜 直接涂片染色镜检 菌体形态、排列、大小、染色性、特殊结构——初步鉴定 单 染 法——只显示细菌的形态与排列 复 染 法——可观察细菌的形态、排列及其染色性 革兰染色（Gram’ stain) 抗酸染色（Acid-fast stain) 特殊染色法——荚膜染色、芽胞染色、 鞭毛染色、异染颗粒 染色法 步骤： 结果: 阳性菌——紫色 阴性菌——红色 结晶紫初染 碘液媒染 乙醇脱色 复红复染 涂片固定 由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。 革兰染色法（Gram Stain） 步骤： 涂片固定 5%石炭酸复红初染 3%盐酸酒精脱色 美蓝复染 镜检 抗酸染色法 结果: 抗酸菌———红色； 非抗酸菌——蓝色。 （二）分离培养与鉴定 液体培养基：增菌培养 半固体培养基：查动力或保存菌种 固体培养基：平板用于分离培养 斜面用于纯培养或保存菌种 菌落 colony 大小、形状、色泽、边缘、透明度、凹凸、湿润度、溶血现象…… 细菌的生长现象 固体培养基 光滑型 粘液型 粗糙型 细菌的生长现象 固体培养基 与鉴定细菌有关的菌落特征： （1）溶血 （2）色素 （3）气味 （三）生化试验（biological tests） 糖类代谢 糖发酵试验 VP试验（Vi） 甲基红试验（M） 枸橼酸盐利用试验（C） 蛋白质代谢 靛基质（吲哚）试验（I） 硫化氢试验 尿素分解试验 糖发酵试验 产酸＋ 产酸产气 不产酸不产气 原理：不同细菌因酶系统不同，能分解不同的糖；细菌分解糖后能产酸；如某些细菌因具有特殊的解氢酶则进一步分解酸产气。 用途： 肠杆菌科细菌的鉴定 如：大肠埃希菌 伤寒沙门菌 + 痢疾志贺菌 — ＋ ＋ 碳水化合物代谢试验 原理： 分解 细菌（含色氨酸酶） 色氨酸 吲哚（靛基质） 对二甲基氨基苯甲醛 玫瑰吲哚 应用：肠道杆菌鉴定 如： 大肠埃希菌+ 沙门菌属 — 蛋白质和氨基酸代谢试验 （四）血清学鉴定（serological tests） 已知抗体（抗血清） 待检抗原（未知菌） 直接法——玻片凝集试验（定性试验） （五）动物试验 主要用于分离、鉴定致病菌，测定菌株产毒性等 （六）药物敏感试验 纸片琼脂法 测量抑菌环直径 （1）沉淀反应（precipitation） 可溶性抗原（细菌可溶性抗原、免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸液等）与相应抗体结合， 形成不溶性免疫复合物，出现不透明的沉淀物。多在半固体琼脂凝胶上进行，形成白色的沉淀。 可分为单向免疫扩散试验、双向免疫扩散试验、免疫电泳、免疫比浊法等。 （七）病原菌的抗原检测 沉淀环 环的直径与抗原含量成正相关 抗体混于琼脂凝胶中制板 对流免疫电泳 （2）协同凝集：用SPA测脑膜炎奈瑟菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌可溶性抗原作早期诊断。 （3）免疫荧光法： 痢疾杆菌荧光Ab→培养基+粪便标本——荧光菌球 （5）免疫印迹技术：对细菌蛋白的检测 （4）酶免疫测定：ELISA测淋球菌、肠道菌抗原检测。 ? 协同凝集试验： 葡萄球菌 SPA IgG抗体 抗原 SPA-IgGFc段-Ag 荧光显微镜 二