高中生物第一章基因工程第二节基因工程的原理和技术学案浙科版选修.docVIP

基因工程 第二节 基因工程的原理和技术 为了实现基因工程的目标，通常要具备多种工具酶、目的基因、载体、宿主细胞等基本要素，并按一定程序操作。 基因工程的基本操作步骤包括：目的基因的获得、重组DNA分子的形成、重组DNA分子导入受体细胞(宿主细胞)、筛选含有目的基因的受体细胞及目的基因的表达。 一、获得目的基因 1．什么是目的基因 人们所感兴趣的(需要的)特定基因，如苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因，还有植物的抗病(抗病毒、抗细菌)基因以及人的胰岛素基因、干扰素基因等，都是目的基因。如果目的基因的序列已知，可用化学法合成和扩增。 如果目的基因的序列未知，可从基因文库中寻找。2．获取方法 (1)人工合成：根据已知的蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使RNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学的方法，以单核苷酸为原料合成目的基因。如人的胰岛素基因等就可以通过人工合成基因的方法获得，或利用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增目的基因。 (2)从基因文库中获取目的基因 3．酶切获得目的基因 用一种限制性核酸内切酶切割人DNA分子，得到含目的基因并具有粘性末端的DNA片段。 二、形成重组DNA分子 用与获得目的基因相同的限制性核酸内切酶切割质粒(载体DNA)，其会露出与目的基因的粘性末端相同的粘性末端，然后用DNA连接酶将目的基因与载体DNA连接在一起，形成重组DN