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SPOT 软件操作手册一、图像获取功能用spot拍摄图像的操作流程1、调节显微镜，直到可以清楚地看到标本。2、将显微鉴定光路转换到拍摄状态。3、打开控制软件，点击屏幕右下角的拍摄协议窗口，选择一个合适的协议。4、点击窗口内（右上角）的LIVE图标，相机开始实时预览，你将看到要拍摄的区域。将焦距调到最清楚（直接调焦，从显示器上就可以直接看到变化），然后关闭LIVE窗口。5、点击get image拍摄，拍摄后的图像出现在屏幕上，至此已经完成了一次基本拍摄。注意：1）开机顺序最好是先打开相机电源，再打开控制软件。2）拍摄时一定要注意显微镜的光路是否转换到拍摄状态。3）上一次所作的所有的参数设置都会被计算机默认保留，所以拍摄前最好察看一下。4）spot 2及以前的型号没有LIVE功能。5）请确定滤光块的位置是否正确（明场时使用BF）SPOT软件提供的厂家设定协议可满足大多数拍摄环境，如果这些协议不能满足实际需要，可对参数进行修改或建立自己的协议。二、建立自己的拍摄协议1、点击setup菜单，2、选取image setup。（以上两步也可以直接在屏幕右下脚菜单处点右键，选择Add）3、选取Add，选择拍摄的模式，如图为协议取一个名字，5、设定各项参数6、点击确定，这是自己的协议将出现在屏幕右下角的协议窗口，以后拍摄时只须选中即可，不必再惊喜逐项设定。三、设置拍摄参数操作流程1、点击setup菜单。2、点击image setup；（以上两步也可以直接在屏幕右下脚菜单处点左键，选择modify）3、选取一个拍摄协议，点击modify。选取图像类型（8位单色/12位单色/24位RGB/36位RGB/48位RGB）拍摄彩色图像时，一般选择24位RGB，因为一般第三方软件均支持此方式。如果是拍摄荧光，在滤光片的选择上最好选择要拍摄的荧光的颜色，这样速度快，图像质量好（例如拍摄绿色荧光，则只选择绿色滤光片）选定曝光方式----自动/手动一般情况下，选择自动曝光，这样质量会比较好，方便调节参数。GAIN值所代表的意思是为CCD芯片中最亮的一点所容纳的电子数，其中1为容纳最多电子数，即满井电子数，2代表1/2满井电子数，以此类推，16代表1/16满井电子数。拍摄透射光时，可以选择任意值，推荐为8；拍摄荧光时，推荐使用1或2。调节曝光因子，数字越大，实际曝光时间越长适用于拍摄荧光，特别是以下情况：如果在拍摄的图像中有一点特别亮，其他的都很暗，并且这个亮点是一个杂点或者不需要的，我们需要的则是那些暗的。这时我们就可以调节这个值（如调节为2.3，它的意思就是在实际的曝光基础上再乘一个2.3的系数）这样再拍摄，就会发现原来的亮点会曝光过度，但是原来不清楚的图像现在变得清楚了BINNING选择光线弱时，可选定BINNING方式，以提高灵敏度，节省时间。数字越大，灵敏度越高，推荐拍摄弱荧光时使用2*2。选择时要注意以下情况：如果要做图像叠加，则一定要使用相同的Binning，否则图像会错位！选择曝光顺序如果相机为3次曝光相机，则曝光顺序可以调整（特别是拍摄比较容易淬灭的荧光时），将容易淬灭的荧光先拍摄。顺序即是RGB的各种组合（R-代表红色，G-代表绿色，B-代表蓝色）选定芯片成像区域Full Chip--------整个芯片成像，Center----------中心区域成像，通过设定百分比决定区域的大小，Region----------设定成像区域的坐标。点击要采取的后处理方式，Spot会在获取图像之后对其进行相应处理后再显示在屏幕上。四、常用的拍摄技巧1、在使用LIVE功能时，选择cortrol可以调节一些参数。（如预览图像显示的颜色，Binning格式，图像的亮度速度与质量的关系等。其中在拍摄弱荧光时推荐Binning使用2*2或3*3，亮度值可稍微调高一点，速度与质量的选择偏向于速度）注：这些参数的默认值一般为：bright为1.0，grama为1.42、拍摄时如果不想把整幅图片都拍下来的话，也可以这样作：先拍摄一幅图片，从中选择感兴趣的区域，用鼠标划出来，然后选择camera--------Set Chip Imaging Region然后会出现对话框，点击OK，这样再拍摄时就会只拍摄你感兴趣的区域。注：做这些工作的前提是载物台一定不能动，如果要拍摄另一个视野则先要把成像区域改为full chip（做法如下：右键点击右下角的拍摄方案，选择modify，再选择full chip即可。）3、明场拍摄方案一般就使用默认的数据就可以了，拍摄荧光时，可能要做一些调整。例如如果荧光比较暗或淬灭比较快，就可以把Bining改为2*2，Gain值改为2或4。4、白平衡功能（适用于明场拍摄）有时由于灯的缘故拍摄出来的图片会整体发黄或发蓝，这个时候就可能要使用白平衡来解决问