第04章蛋白质化学.ppt

第五节 蛋白质的性质 Characters of Protein 一、蛋白质分子的大小、形状及分子量测定 1、分子筛层析 2、SDSSDS-十二烷基硫酸钠 3、生物质谱 二、蛋白质的变性 * 蛋白质的变性(denaturation) 在某些物理和化学因素作用下，其特定的空间构象发生改变或破坏，从而导致其理化性质改变和生物活性的丧失。 1、变性的本质 —— 破坏非共价键和二硫键，不改变蛋白质的一级结构。 生物活性的丧失 理化性质的改变 如：黏度增加，失去结晶能力，易被蛋白酶水解等 2、变性蛋白的特征 3、变性作用的因素和程度 如加热、紫外线、乙醇等有机溶剂、强酸、强碱、重金属离子及生物碱试剂等 。 4、变性作用的意义 酒精、紫外线消毒； 高温灭； 除去杂蛋白； 避免活性成分变性。 1、氨基酸的两性解离及等电点 氨基酸是两性电解质，其解离程度取决于所处溶液的酸碱度。 氨基酸等电点(isoelectric point, pI) 在某一pH的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，成为兼性离子，呈电中性。此时溶液的pH值称为该氨基酸的等电点。 三、蛋白质的两性电离与等电点 pH=pI +OH- pHpI +H+ +OH- +H+ pHpI 氨基酸的兼性离子 阳离子 阴离子 （二）蛋白质的二级结构 蛋白质分子中某一段肽链的局部空间结构，即该段肽链主链骨架原子的相对空间位置，并不涉及氨基酸残基侧链的构象。 定义 主要的化学键： 氢键 蛋白质二级结构的主要形式 ?-螺旋 ( ? -helix ) ?-折叠 ( ?-pleated sheet ) ?-转角 ( ?-turn ) 无规线团 ( random coil ) 肽键具有部分双键的性质，不能自由旋转。参与肽键的6个原子C?1、C、O、N、H、C?2位于同一平面，称为肽键平面，也称肽单元 (peptide unit) 。 1.肽单位 2. ?-螺旋 结构特点： 右手螺旋 每螺旋圈包含3.6个氨基酸残基，每个残基跨 距0.15nm，螺旋上升一圈0.54nm。 相邻螺旋之间通过肽键上的酰基氧与亚氨基氢 间形成氢键保持螺旋结构稳定。氢键方向与螺 旋长轴基本平行。 氨基酸侧链伸向螺旋外侧，对?-螺旋的形成有一定影响。 二级结构中的氢键 3.?-折叠 要点： ⑴ 肽键平面折叠成锯齿状（折纸状）R－基团交错位于齿状结构上下方 ⑵氢键维持稳定与主链长轴垂直 ⑶两条以上肽链并列时， ?-片层有顺式和反式平行(4)R-基团太大时， ?-折叠不易形成 β-折叠：顺式和反式中的氢键 4. ?-转角 ?-转角 无规卷曲是用来阐述没有确定规律性的那部分肽链结构。 5.无规卷曲 RNase的分子结构 （三）超二级结构模体(motif) 多肽链顺序上相邻的二级结构常常在空间折叠中靠近，彼此相互作用，形成有规则的二级结构聚集体(motif)。这种规则的二级结构的聚集体称为超二级结构，它们可直接作为三级结构的“建筑块”或结构域的组成单位，是蛋白质发挥特定功能的基础。 钙结合蛋白中结合钙离子的模体 锌指结构 纤连蛋白分子的结构域 （四）结构域（domain） 在较大的蛋白质分子中，由多肽链上相邻的超二级结构紧密的联系，进一步折叠形成一个或多个相对独立的三维实体，各行使其功能，称为结构域(domain) 。 特点： 结构域与分子整体以共价键相连 具有相对独立的空间构象和生物学功能 同一蛋白质中的结构域可以相同或不同，不同蛋白质中的结构域也可能相同或不同 疏水键、离子键、氢键和 Van der Waals力等。 主要的化学键：次级键 整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置。即肽链中所有原子在三维空间的排布位置。 (五）蛋白质的三级结构 具有三级结构的蛋白质才具有生物学活性，三级结构一旦破坏，蛋白质的生物学功能丧失 胰岛素分子的三级结构 溶菌酶的三级结构 （六）蛋白质的四级结构 血红蛋白的四级结构 蛋白质结构示意图 三、蛋白质和多肽合成的基本原理 （二）采用生物技术合成蛋白质 （一）化学合成法的基本原理 1. 氨基酸的基团保护 2. 多肽的液相合成 3. 多肽的固相合成 1. 基因工程 2. 细胞工程 3. 酶工程 蛋白质结构与功能 Structure and Function of Protein 第 四 节 一级结构是蛋白质生物学功能的基础 一、蛋白质一级结构与功能的关系 1、一级结构不同，功能不同 （一）一级结构与功能的关系 剩2-10％ 丧失活性 活性仍100％ 2. 一级结构中“关键”部位相同，其功能也相同