人ifn-γ检测试剂盒elispot法说明书.pdf

人IFN-检测试剂盒（ELISPOT 法）说明书 【产品名称】人IFN-检测试剂盒（ELISPOT 法） 【包装规格】96 T/盒 【预期用途】 本试剂仅供科研使用，不适合用于临床检测。用于测定特定细胞样本中（例如PBMCs ） 分泌IFN-的细胞比例，从而测定细胞对于特定抗原的免疫响应。 【IFN-简介】 20 世纪30 年代，许多病毒学家在研究两种病毒感染同一宿主细胞时，发现普遍存在两 种病毒相互拮抗的现象，由此产生了病毒间干扰现象的概念。1957 年发现细胞与病毒一起 培养后能产生一种可溶性因子，该因子能“干扰”病毒感染新的细胞，此因子被称为 “干扰 素”。此后证明干扰素（interferon ，IFN ）是由一族分泌蛋白质组成，对同种病毒具有广谱 抗病毒活性，它存在于各种脊椎动物体内，平时细胞内含量很低，经病毒或其它干扰素诱导 剂诱导后产量可以提高。IFN 蛋白家族基于它们的基因序列、染色体定位和受体特异性分为 3 型，即I 型、II 型和III 型干扰素。I 型包括 IFN-、、、、、、、等；II 型干扰 素由单基因家族IFN-构成，又称为免疫干扰素；III 型干扰素是一种新发现的细胞因子，与 I 型干扰素关系密切，称为IFN-。 -干扰素主要是由抗原、有丝分裂素等刺激、活化的CD4+Th1、CD8+T细胞及NK细胞 所分泌的一类可溶性糖蛋白。抗原、T细胞促分裂素（PHA 、ConA ）、细胞因子（IL -2 、IL-12、 IL-18、bFGF 、PDGF、EGF ）、葡萄球菌肠毒素B ，均会诱导-干扰素的合成。 【检验原理】 机体被外来的病原感染后，会产生一系列的免疫应答反应，其中重要的一条免疫途径是 细胞免疫。机体内的T细胞受到抗原的刺激致敏，产生效应T淋巴细胞，当这些T细胞再次受 到相同抗原刺激时，会发生特异性免疫反应，分泌多种细胞因子如γ-干扰素。 经适当分离、处理的细胞（如PBMCs ）与相应刺激免疫原一起加入到预包被抗γ-干扰素 抗体的PVDF膜微孔中，培养一段时间。若细胞被激活开始分泌γ-干扰素，局部（在紧靠分 泌细胞的周围）分泌出的γ-干扰素会被PVDF薄膜上特异抗体捕获。被捕获的γ-干扰素可进 一步与辣根过氧化物酶偶联的抗γ-干扰素抗体特异性结合并使其滞留在PVDF薄膜表面，最 后通过显色底物使其在反应部位形成不溶性斑点，每一个斑点代表一个分泌γ-干扰素的细胞， 记数斑点数量可以获得被激活细胞的数量。并通过与总细胞数的比值，可以进一步计算在被 激活细胞的频率。 1 / 4 【主要组成成分】 1、试剂盒组分 序号 组分名称 规格 数量 主要成分 预包被细胞培养微孔 由 12×8 孔的可拆卸板条组成，已包被 1 板 96 孔 1 块 鼠抗 （人IFN-抗体） 人IFN-单克隆抗体 2 阴性质控 1 mL 2 瓶 无抗原的基质液 3 阳性质控 1 mL 2 瓶 主要成分为植物凝集素PHA 含有HRP 标记的鼠抗人IFN-单克隆 4 酶标液 （人IFN-） 12 mL 1 瓶 抗体 5 浓缩洗涤液（10×） 30 mL 1 瓶 主要成分为磷酸盐缓冲液 AEC 显色液A 0.6 1 瓶 含过氧化氢 6 mL 7 AEC 显色液B 12 mL 1 瓶 含3-氨基-9-乙基咔唑 8 说明书 / 1 份 / 注：不同批号试剂盒中各组分不能互换 2 、需要实验