改良蔗糖衬垫法提取苎麻mtDNA.pdfVIP

2010年23卷4期 西 南 农 业 学 报 VoL23 N仉4 SouthwestChinaJournalofA culturalSciences 1377 文章编号 ：1001—4829(2010)04—1377—03 改 良蔗糖衬垫法提取苎麻 mtDNA 侯思名 ’2一，翟书华 ，岑晓江 ，杨晓虹 ，窦玉敏2，曾黎琼 ，刘飞虎 (1．云南大学生命科学学院，云南 昆明 650091；2．昆明学院生命科学与技术系，云南 昆明 650118；3．云南省农业科学院生物 技术与种质资源研究所 ，云南 昆明 650223) 摘 要：苎麻组织中含有较多的酚类、粘状物及黄酮类等次生代谢物质，其mtDNA 的提取 比较 困难。本实验 中采用蔗糖衬垫法提 取苎麻mtDNA。提取过程中往缓冲液中加入抗氧化性物质来减轻DNA 的褐变；同时在酚一氯仿／异戊醇抽提过程中加入高盐溶 液，用以去除多糖；且采用擦镜纸而不是纱布过滤可提高mtDNA的得率。mtDNA的ISSR检测结果表明，蔗糖衬垫法提取mtDNA 时，辅助加入抗氧化剂和高盐溶液效果较好。 关键词：苎麻；mtDNA提取；蔗糖衬垫法；改良 中图分类号：s563．1 文献标识码：A OptimizedProtocolforRamiemtDNA ExtractionBasedon Sucrose．mediatedSedimentationM ethod HOU Si．ming-·，ZHAIShu—hua2， CENXiao-jiang2，YANGXiao—hong2。DOUYu—min，ZENGLi—qion~，LIUFei-hu ‘ (1．LifeScienceCofiege，YunnanUniversity，YunnanKunming650091，China；2．CollegeofLifeScienceandTechnology，KunmingUni— versity，Yunnna Kunming650118，China ；3．Biotcehnology ＆ GeneticGermplasm Institute，YunnanAcademyofA culutralSc iences， YunnanKunming650223，China) Abstract：TheextractionofmtDNAWaSdifficultthanthatofgDNA，duetoahiighcontentofsecondarymetabolicproductssuchaspolysac- charides，hydroxybenzencnadflavoneinramie[Boehmer／anivea(L．)Gnad]，naoptimizedprotocolforramiemtDNAextractionbasedon 8UCro~一mediatde sedimentation wasproposed．AntioxidantWas addde intotheextraction buffer，whichcould preventthe solutionfrom browning．Hishconcentrationsaltsolutionfi4％ NaC1wasusedtol~movepolysaccharidcsintheextractionprocesswithehlordorm-isapentano1． ThemONA templates extractedwihtthe~bovemodifide methodpresentedbetterbandl~temsinISSRP·CRamplification．indiactingthatthec0 binatino ofsucrose-mediatde sedimentatino methodwi山 natioxidantnadhJighsaltsolutionw8ssuitableforhte~Ktllletino ofnm emtDNA． Keywords：Ramie；mtDNA extraction；Sucrose-mde iatde sedimentation；Modifiedpro