定点突变技术提高内切葡聚糖酶基因f-10酶活性 improving the character of the f-10 endoglucanase gene by site-directed mutation.pdfVIP

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2017-11-16 发布于上海
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定点突变技术提高内切葡聚糖酶基因f-10酶活性 improving the character of the f-10 endoglucanase gene by site-directed mutation.pdf

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定点突变技术提高内切葡聚糖酶基因f-10酶活性 improving the character of the f-10 endoglucanase gene by site-directed mutation

定点突变技术提高内切葡聚糖酶基因F一10酶活性唐自钟，刘默洋，李雨霏，孙蓉，刘姗，陈惠4，韩学易 (四川农业大学生命科学与理学院，四川雅安625014) 摘要：利用高酶活F一10突变株内切葡聚糖酶基因进行定点突变，对91位(K91E)和369位后，分离纯化酶学性质分析。结果表明：蛋白质相对分子质量为53000；突变前后最适1)H值未发生变化，为pH 温度发生了很大的变化，为40℃；酶的比活力分别为202、162．8、77．9U／mg，分别是原始酶(66 U／mg)的3．0倍，2．4倍和1．2倍；三个突变酶的热稳定性有较大提高，70℃处理1h后，原始酶的 K369R剩余活力为41％。当经80℃处理1h后，K91E残余活力仍有22％。本研究获得了酶活性提高的内切葡聚糖酶菌株，为进一步在分子水平研究内切葡聚糖酶的功能及应用打下了基础．也为高酶活酶分子在其他高表达系统的表达提供了基础材料。关键词：内切葡聚糖酶；定点突变；分离纯化；热稳定性；酶学性质；结构分析中图分类号：Q815文献标志码：A 文章编号：1673—1689(2014)08—0870—07 theCharacteroftheF一10 Gene InlproVing Endoglucanase Site—DirectedMutation by IANG ZiZhong，LlUMoynllg，LIYt毋t，sUNRong，LIUsh(m，CHENHu#，HANxueyi of and (CollegeBiologyScience，SichuanUniversity，Ya7an625014，China) Agricultural isoneofthemost cellulose enzvmes，However，the Abstract：Endoglucanaseimportant large—scale industrializedofthese wasrestrictedthelow and cost applicationenzymes by activitvhigh price． their and wasconsideredan ImpIDVingactivitythroughgenetic engineeringproteinengineering efficient tocutdownthecost this thesite—directedmutation approach price．Instudv technologv wasusedto the oftheF一10 ceUuloseof improveactivity endoglucanasegene．The endoglucanase 91lysine(AAA)wasreplacedby acid(GAA)(K91E)，369 glutamic lysine(AAA)wasreplacedby the91and369were