用膜结晶技术制备蛋白质晶体的研究.pdfVIP

第二届全国膜分离技术 2006年11月 在食品工业中的应用研讨会论文集 用膜结晶技术制备蛋白质晶体的研究 张新妙，马润宇“ (北京化工大学生命科学与技术学院，北京100029) 摘要：概括了膜结晶技术的产生背景、膜结晶技术的基本过程及其原理和优点，介绍了国内 外膜结晶过程的应用情况，并根据常规结晶方法，讨论了蛋白质膜结晶过程中的主要影响因 素，最后展望了膜结晶的发展前景。 关键词：膜结晶；蛋白质；结晶 中图分类号：Q617文献标识码：A 蛋白质科学在材料业、制药业、农业、化学工业 到蛋白质等生物大分子的晶体，在这种情况下， 中得到越来越多的关注，但众所周知，生物高分子的 Chayen等”1尝试用多孔硅支撑层作为一些目标蛋 功能与它的分子结构紧密联系因此，无论我们要了 白质诱导晶核形成的载体(溶菌酶、伴刀豆球蛋白 解生物高分子的生物活性或设计在病理学中有特殊 A、过氧化氢酶、藻胆蛋白、胰岛素)，获得了成功，甚 靶点的新型药物，都必须先决定分子的特殊结构，这 至在不足以自发成核的过饱和度下也有晶体析出． 就需要得到适合于衍射分析的蛋白质晶体．然而，就 目前来说，由于蛋白质等生物大分子特有的物理化 合物薄膜表面上在短的诱导时间内就能发生结晶， 学性质，使得对蛋白质等生物大分子的晶体培养要 并且蛋白质浓度比标准蒸汽扩散技术所需的要低 比一般小分子化合物困难的多，一般小分子结晶的 10倍；和溶菌酶不同的是，薄膜表面是否存在可电 方法都不适合应用于大分子的晶体生长，因此，蛋白 离基团强烈影响伴刀豆球蛋白A的结晶，因为薄膜 质等生物大分子的晶体培养工作已成为当前阻碍提 表面的荷电基团可能和蛋白质的一部分或特殊基团 高晶体结构分析速度的关键性问题．为此，人们正在 发生相互作用，促进了分子碰撞和聚集体形成，而对 作进一步的努力，探索新的结晶技术和更系统的结 溶菌酶没有影响可能是由于溶菌酶的结构紧凑；研 晶方法以得到完美的大尺寸的蛋白质晶体用于衍射 究也强调r薄膜表面的可电离基团的存在使得诱导 分析，测定蛋白质分子的结构和空间构型．膜结晶技 时问和蛋白质浓度下降而成核密度升高 术就是在这个时候出现的，用膜结晶法结晶蛋白质 Rong等Hj研究了涂敷在玻璃底层上的聚L一 溶液可得到适合于衍射分析的大分子蛋白质晶体， 赖氨酸选择性的控制四边形溶菌酶晶体的晶面指标 这对蛋白质分子与酶的科学研究有着重要的意义． 为110面或101面以上这些虽然不是膜结晶技术， 但其中均蕴含了将一种物质或膜作为异类成核表面 1膜结晶技术 结晶蛋白质的思想，对膜结晶技术的产生给予了很 1．1膜结晶技术的产生背景 大的推动力，膜结晶技术就是在这种情况下出现的 大分子蛋白质具有许多不同于无机物及小分子 l 2膜结晶的基本过程及其原理和优点 有机物的性质，如：分子量很高，静电特性，几何形状 膜结晶是膜蒸馏与结晶两种分离技术的耦合过 较复杂，物理化学性质的不稳定性，本身带有辅基、 程，其原理是通过膜蒸馏来脱除溶液中的溶剂，浓缩 配体等特殊因子，这使得蛋白质的结晶过程变得复 溶液，使溶液达到过饱和，然后在晶核存在或加入沉 杂，一般小分子结晶的方法都不适合应用于大分子 淀剂的条件下，使溶质结晶出来它是一种不同于常 的晶体生长【1J，因此，需要探索新的结晶方法以得 规结晶技术的新型结晶分离技术，它建立在微孔疏