生物化学试验教案-水产科学与技术试验教学中心.PDFVIP

生物化学实验教案 2008—2009 学年度第 一 学期 开课单位 水产学院 课程名称 生物化学实验 授课班级 养殖0713 任课教师 韩 芳 试验一蛋白质显色反应和氨基酸纸层析 （一）蛋白质的显色反应 一、 目的要求： 1、理解蛋白质具有双缩脲反应。 2、理解蛋白质和α--氨基酸均能与茚三酮作用产生有色化合物。 3、了解氨基酸、蛋白质的某些侧链功能基团能发生黄色反应、米伦氏反应 等显色反应。 二、教学方法和教学学时： 1、教学方法：学生操作实验，教师指导。 2、教学学时：2 学时。 三、实验内容： 蛋白质是由很多氨基酸通过特殊的结构而形成的，氨基酸以及这些特殊的结 构与化学试剂作用而产生颜色，称呈色反应。蛋白质的呈色反应非常灵敏， 常用作检验蛋白质和某些氨基酸的反应，也是定量测定的依据。 一、双缩脲反应：验证蛋白质具有双缩脲反应，能观察到蓝紫色的出现。 l．取小量固体尿素，故在干燥小试管中，在弱火上加热，此时尿素溶融并 放出氮，直到溶融物呈白色而坚硬的停止加热。 2．冷却后，加入10％NaOH 溶液1ml，摇匀溶解，再加入1％CuSO4 溶液5 滴， 摇匀，观察颜色。 3．取另一小试管，加入10％NaOH 溶液1ml 及1％CuSO 溶液5 滴，后逐滴加 4 入1％卵清蛋白溶液，观察溶液颜色的变化。 二、茚三酮反应：验证蛋白质能与茚三酮作用产生蓝紫色化合物。 l．取干净滤纸一小片，滴上1％酪氨酸溶液1 滴，酒精灯上小火烘干。 2．冷却后加 l～2 滴 0.1％茚三酮酒精溶液，待酒精蒸发后烘干(注意勿着 火)，观察出现颜色。 三、黄色蛋白反应: 验证蛋白质的某些侧链功能基团能发生黄色反应（与 浓HNO3 反应）。 l、取1％卵清蛋白lml 于溶液中，加浓硝酸（3－5）滴，此时出现蛋白质沉 淀（为什么？），小心加热，观察沉淀颜色的变化。 2、用自来水冷却试管，逐渐滴人40％NaOH 溶液使之成为碱性，观察沉淀颜 色的变化。 四、作业：实验报告 （二）氨基酸的纸层析法分离 一、目的要求： 1、掌握分配层析分离技术的原理。 2、掌握用纸上分配层析法分析氨基酸的方法。 二、教学方法和教学学时： 1、教学方法：学生操作实验，教师指导。 2、教学学时：2 学时。 三、实验内容： 以滤纸及其结合水作为固定相，以有机溶剂（正丁醇：醋酸：乙醇： 水=4：1：1：2）作为流动相，分离混合氨基酸样品，并鉴定其成分。 四、结果与分析： 用铅笔轻轻描出显色斑点的形状，并用一直尺度量每一显色斑点中心与原 点之间的距离和原点到溶剂前沿的距离，计算各色斑的R 值，与标准氨基 f 酸的Rf 值对照，确定水解液中含有哪些氨基酸。 （一）实验结果 混合样品 标准氨基酸 亮 氨 谷 氨 酪 氨 组 氨 酸 酸 酸 酸 Rf 成 分 计算公式： （二）分析结果： 五、注意事项