蛋白折叠试剂盒说明书.PDFVIP

蛋白折叠试剂盒说明书 产品编号：BTN131121 规格：100T 产品及特点： 本产品由九种变性能力不同的缓冲液和七种添加因子组成，前者可防止蛋白聚集，后者可用于促 进蛋白折叠回天然结构。本产品使用开放式实验设计，适用于筛选不同蛋白的最适折叠条件。本产品 特点如下： 1. 可靠：所选缓冲液和添加因子是目前最常用的，普适性广。 2. 方便：采用两轮筛选，减少了工作强度。 3. 可调节：可以根据不同蛋白自行调整各种参数。 4. 即开即用：用户不需要单独配制各种溶液，简单快捷。 规格及成分： 成分 规格 基础折叠缓冲液A-I 9×10ml 二硫苏糖醇 （DTT） 100mg 还原型谷胱甘肽 （GSH） 120mg 氧化型谷胱甘肽 （GSSG） 100mg 10mM聚乙二醇 （PEG） 1ml 二价阳离子溶液 （0.4M MgCl2 和0.4MCaCl2） 0.5ml 5 M NaCl溶液 1ml 100mMEDTA溶液 1ml 说明书 1份 保存条件： 低温运输，-20℃保存，有效期一年。 自备试剂： 超纯水、包涵体纯化试剂盒、包涵体溶解液。 使用方法： 一、样品的准备 1、包涵体的纯化：一次筛选实验需要大约10-40 mg 纯度在80%以上的包涵体。本试剂盒不含包涵体 纯化的相关试剂，但可另行从本公司购买。 2、包涵体的溶解：必须使用自备的包涵体溶解液 （6-8 M 盐酸胍，50mMTris-HCl，pH 8.0）溶解包涵 体以便跟本产品兼容。样品终浓度应该在10-20mg/mL，蛋白浓度可以用考马斯亮蓝法或OD280 光吸收 法测定。 3、蛋白的纯化：若包涵体蛋白纯度高于80%，则跳过此步；若低于80%，则需要进一步纯化直到达到 要求。对标签蛋白，可用标签蛋白相关纯化试剂盒或自配试剂纯化。对非标签蛋白，可用排阻层析方 法纯化。纯化后的蛋白浓度在1-2 mg/mL 即可 （作为低浓度样品）。浓度测定方法同上。 4、蛋白的还原：蛋白必须处于还原状态才能用于折叠实验。如果天然靶蛋白不含二硫键，所得溶液可 直接用于折叠实验；如果天然靶蛋白含二硫键，并且纯度达标，则不需第3步的再纯化处理，但需要 在第2 步的包涵体溶解液中再加入5-50mM 的DTT 和1mM 的EDTA 以让错误形成的二硫键还原（如果需 要纯化处理，则能不能加DTT 取决于是否影响后续纯化）。检查蛋白是否处于还原状态的方法是将同一 样品分别用含还原剂和不含还原剂的SDS上样液上样进行肩并肩的SDS电泳来比较条带的 清晰度。样品所含还原剂必须要在进行折叠实验前用自备的蛋白脱盐试剂盒脱盐去除，否则会影响折 叠。 5、将处于变性和还原状态的蛋白溶液一管稀释到0.5-1.0mg/mL作为低浓度样品，另一管稀释到10-20 mg/mL 作为高浓度样品，体积各450μL，放置冰上待用。 6、试剂的准备：DTT （MW 154.25）、GSH （MW 307.33）和GSSG （MW 612.64）均需要在使用前用超纯水 分别配制成500mM、200mM 和100mM 的溶液，分装成小管放-20℃保存。 二、第一轮筛选实验 （筛选9 个变性强度、3 个还原条件和2 个蛋白浓度变量） 7、标记 18 个塑料离心管并按下表加入各成分，终体积是950μL （注意：此处EDTA、GSH、GSSG的用 量只是作为参考，用户可以更改任何参 数，包括各成分用量和总体积。EDTA 可以维持氧化还原态的稳定，但如果蛋白含有金属辅因子，则需 要将其删掉）：