cDNA文库均一化处理.pptVIP

三、cDNA文库均一化处理 定义： 将构建好的独立cDNA文库进行均一化处理，可将其中表达丰度高或较高的组分去除一部分，从而制备均一cDNA文库。 构建均一化cDN文库主要途径: 1.基因组DNA饱和杂交法 2.基于复性动力动力学原理的均一化方法 第二节 cDNA文库的构建 1.基因组DNA饱和杂交法 三、cDNA文库均一化处理 过程： 1) 将基因组DNA用限制性内切酶消化固定，消化后的基因组DNA变性为相对较短的单链且最大可能地覆盖基因组； 2） 分离纯化独立cDNA文库的质粒； 3） 文库DNA与固定的基因组DNA充分饱和杂交，固定住相应的cDNA，并将它洗脱重新转化受体菌。 2.基于复性动力学原理的均一化方法 双链DNA在加热变性后再复性形成双链DNA的速率遵循二次复性动力学原理（second-order kinetics）,即与组分中单链DNA的浓度相关。 类型 复性所需时间 高丰度cDNA 较短 低丰度cDNA 较长 过程： 1）通过控制复性时间可使高丰度cDNA复性成双链状态，而低丰度cDNA仍保持单链状态，从而将单链和双链cDNA分开；