二恶英反应增强子调控的虫荧光素酶报告基因质粒的构建.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’()!*’)# 年 月 #$$! % !#$%%’()*$+,( .#(/%0$(,( +,-./ #$$! - 12 !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 二恶英反应增强子调控的虫荧光素酶报告基因质粒的构建 张志仁 徐顺清 周宜开 任 恕 吕 斌 （华中科技大学同济医学院环境医学研究所，武汉市 ） ?%$$%$ 摘 要 为加强二恶英类化学物质的快速筛选和半定量检测，我们构建了一在二恶英反应增强子调控下的虫荧光 素酶报告基因质粒。二恶英反应增强子来源于 质粒， 启动子来源于 质粒，上述两者连接后与 AB ++3 C,D+ @ @ 虫荧光素酶载体连接，转染人 肝癌细胞，以 ，，， 四氯代二苯并二恶英（ ）诱导报告基因表达后检 A4E# #%10 3CFF @ 测虫荧光素酶活性。结果表明该质粒中虫荧光素酶的表达受二恶英反应增强子的调控，且在一定浓度范围内虫荧 光素酶的活性与3CFF的量呈线性关系。研究显示该质粒转染的细胞株有望用于快速筛选及半定量检测二恶英， 可进一步加强研究作为二恶英类化学物质监测的常规方法。 关键词 二恶英类化学物质，虫荧光素酶，报告基因，二恶英反应增强子 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） G12 B !$$$0%$5!#$$!$#0$!$0$H 二恶英类化学物质是一大类能与芳香烃受体结 建一在二恶英反应增强子调控下的虫荧光素酶报告 合，并产生二恶英类毒性损害的化学物质。它们结 质粒，该质粒中虫荧光素酶的表达在二恶英反应增 构相近，与机体作用产生毒性的机理也相近。这类 强子的调控之下。将该质粒转染含芳香烃受体的人 物质主要包括多氯代二苯并二恶英，多氯代二苯并 肝癌细胞中，筛选出稳定转染的细胞株，则 A4E# @ 呋喃和多氯联苯中的某些种类。它们毒性作用广 该细胞中虫荧光毒酶的表达受芳香烃受体的调节。 泛，且作用剂量低，在环境中广泛存在，并且可以通 二恶英类物质与该细胞株作用，即可剂量依赖性地 ［ ］ 过生物链富集，对人类健康危害极大!# 。 诱导虫荧光素酶的表达，因此可用该细胞株定性或 二恶英类化学物质对机体危害很大，急需加强 半定量地检测作用于细胞的二恶英类化学物质。 对它们的日常监测。但目前检测二恶英的金标准— ! 实验方法 色谱学方法，由于需要高精密的仪器、专门的技术人 员和严格的质量控制，全世界仅有少数实验室具备