基于启动子和宿主改造的酿酒酵母表达系统优化研究.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，３５（１）：６１６６ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 基于启动子和宿主改造的酿酒酵母表达 系统优化研究 张　旭　王晶晶　刘建平 （复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室　上海　２００４３３） 摘要　生物医药领域中一套高效表达系统对于重组蛋白的生产至关重要。酿酒酵母作为一种食 品级真核微生物，具有繁殖迅速、培养简单、遗传操作便捷等特点，是生产重组蛋白较理想的表达 系统之一。对实验室已有的ｐＨＲ酿酒酵母表达系统进行优化。分别通过易错 ＰＣＲ技术和菌株 诱变技术对酿酒酵母启动子Ｐ 和宿主酿酒酵母Ｙ１６进行突变改造，经筛选、鉴定获得表达性能 ＴＥＦ 提高的启动子Ｐ 和酿酒酵母Ｙ１６Ｅ１４、Ｙ１６Ｅ１９。随后，利用启动子Ｐ 构建以Ｙ１６Ｅ１４为宿 ＴＥＦＶ１ ＴＥＦＶ１ 主的ｐＨＲＮ酿酒酵母表达系统，以绿色荧光蛋白和人血清白蛋白为对象，比较表达系统改造前后 性能变化。结果显示ｐＨＲＮ酿酒酵母表达系统无论胞内表达绿色荧光蛋白还是分泌表达人血清 白蛋白的能力均较改造前明显提高。ｐＨＲＮ系统为获得更多具有重要应用价值的重组蛋白提供 了有利的工具。 关键词　酿酒酵母　表达系统　启动子　宿主　优化改造 中图分类号　Ｑ８１５ 　　酿酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）是一种低等单 复合诱变，获得了一定数量的正突变株，其中产能提高 细胞真核生物，具有安全、生长繁殖快、培养简单、遗传 最高的１株发酵物中海藻糖含量达到１６％，比出发菌 操作便捷等特点，广泛应用于酿造、食品、医药等领域， ［４］ 株提高了１０％ 。 一直是基础和应用研究的重要对象。酿酒酵母系统是 　　启动子（ｐｒｏｍｏｔｅｒ）位于结构基因５＇端上游区，是 最早发展起来用于表达异源蛋白的真核表达系统，第 ＲＮＡ聚合酶的结合区。启动子区的结构影响其与 一个商品化的重组疫苗—乙肝疫苗即来自酿酒酵母， ＲＮＡ聚合酶的亲和力，进而影响基因的转录表达效率。 ［１２］ ? 随后陆续有很多外源基因在该系统中成功表达 。 通过对启动子改造，筛选强启动子，是提高宿主重组蛋 　　影响外源基因在宿主内表达有多方面因素，包括 白表达水平的一种重要的方法［５］。ＰａｒｔｏｗＳ等都通过 ［６７］ 启动子效率、宿主遗传特性、外源基因拷贝数及稳定 ? 筛选、构建强启动子实现了重组蛋白的高效表达 。 性、培养条件等。近年来，利用基因工程方法和诱变育 　　ｐＨＲ酿酒酵母表达系统是本实验室前期研究中基 种来提高酿酒酵母表达蛋白能力、代谢产物等的研究 于酵母 ２ 质粒构建的一种新型酿酒酵母表达系 μ 进展较快。ＭｉｕｒａＳ等人利用亚硝基胍诱变 １株 Ｌ乳 ［８９］ 统 。与传统的以抗生素抗性基因作为筛选标