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DNA聚合酶 DNA polymerase （一）概述 DNA的复制是通过半保留复制实现的。在这个过程中，每条亲代单链都是一条新子链的合成模板。其中DNA聚合酶将核苷酸单体一个个添加到生长的链上。每条链形成时，都与它的亲代模板形成氢键。 DNA聚合酶的作用：催化DNA的合成（模板、引物、dNTP等）及其相辅的活性。 DNA聚合酶的定义 真核细胞有5种DNA聚合酶，分别为DNA聚合酶α（定位于胞核，参与复制引发，不具5－3外切酶活性），β（定位于核内，参与修复，不具5－3外切酶活性），γ（定位于线粒体，参与线粒体复制，不具5－3，有3－5外切活性），δ（定位核，参与复制，具有3－5，不具5－3外切活性），ε（定位于核，参与损伤修复，具有3－5，不具5－3外切活性）。 DNA聚合酶的定义 原核细胞有3种DNA聚合酶，都与DNA链的延长有关。DNA聚合酶Ⅰ是单链多肽，可催化单链或双链DNA 的延长；DNA聚合酶Ⅱ则与低分子脱氧核苷酸链的延长有关；DNA聚合酶Ⅲ在细胞中存在的数目不多，是促进DNA链延长的主要酶。 （二）DNA聚合酶的常见种类 大肠杆菌DNA聚合酶 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow酶 T4DNA聚合酶 T7DNA聚合酶 修饰的T7DNA聚合酶 反转录酶 共同特点：能把脱氧核糖核苷酸连续的加到双链DNA 分子引物链的3’-OH末端，催化核苷酸的聚合作用，而不发生从引物模板上解离的情况。 （三）DNA聚合酶的反应特点： ⑴以四种脱氧核糖核苷三磷酸做底物； ⑵反应需要接受模板的指导，因为DNA的多聚化反应是按碱基配对的原则由模板DNA链指导下完成的； ⑶反应需要有引物3’-OH存在。所谓引物是互补于模板链的一个寡聚核苷酸片段，它带有一个游离的3’-OH ，以便与后来的核苷酸残基建立磷酸二酯键； ⑷DNA链的生长方向为5’→3’； ⑸产物DNA的性质与模板相同。 （四）DNA聚合酶只能在5’-P →3’-OH方向上起作用 所有已知的聚合酶（包括DNA和RNA的）都只能使链沿5’ → 3’方向生长，即聚合体的生长末端必须有游离的3’-OH。 Why? DNA之所以从5’ 末端向3’末端方向合成，是由合成DNA的聚合酶的催化机制决定的。DNA聚合反应的基本反应是生长链的末端核苷酸的3’-OH对下一个参加聚合反应的脱氧核苷三磷酸的α-磷原子发动的亲和进攻并释放出焦磷酸。反应方程式是： （dNMP）n +dNTP →（dNMP）n+1+PPi DNA 延长了的DNA 式中， dNMP 和dNTP 代表任意一个核苷酸残基和核苷三磷酸。 两条DNA链是反平行的，为什么3’ → 5’ 聚合酶在DNA复制过程中不能起作用呢？ 聚合酶进化为5’ → 3’的方向，可能是因为这样有利于（对错误的）编辑。如果要发生3’ → 5’ 的生长，在引入的、要与生长链发生反应的核苷酸的5’-三磷酸和3’-OH存在的情况下，生长链也可能被中止。从化学角度来看， 3’ → 5 ’的生长确实可以接受。然而，因为这种情况下形成的键只含有单个磷酸，所以核酸外切酶用于去掉错配碱基的编辑功能，将在生长链的末端留下游离的5’-单磷酸。为了使链的生长回复，需要一个酶系统进入复制叉，将单磷酸转变为三磷酸，这样看来要求5’ → 3’的生长是惟一的，对细胞更加经济。 That’s all ! Thank you !