第六章 磺胺类1.ppt

第六章 兽药残留检测技术 第五节 磺胺类药物残留的危害分析与检测方法 一、概述 磺胺类(Sμlfonamides)药物是兽医上较常用的一类合成抗感染药物,具有抗病原体范围广、化学性质稳定、使用方便、易于生产等优点。 磺胺药种类繁多,兽医上常用的有10余种(图) 。 磺胺药单独使用,病原体易产生耐药性,与抗菌增效剂如TMP(甲氧苄啶)等联用,抗菌范围扩大,疗效明显增强,用来治疗畜禽肠道感染、乳腺炎、肺炎等疾病。 同时也被广泛的用作饲料添加剂,用来增肥 犊牛和猪。 吸收后存在形式 磺胺药吸收后,一部分在血浆中保持游离状态(游离型),一部分与血浆蛋白相结合(结合型),另一部分在肝脏中高度乙酰化变成乙酰磺胺。 游离型具抗菌作用,且能透过毛细血管进入各种体液和组织。 结合型无抗菌活性,也不能透入体液或组织中,但结合较疏松,能不断分解出游离型磺胺。 乙酰化是磺胺的主要代谢产物,无抗菌活性。 体内分布、代谢 磺胺药在体内分布相当广泛。各种组织和体液均能到达。以血液中含量最高,肝、肾次之,胸水、腹水、滑膜液、房水中浓度也较高,并能透过胎盘进入胎儿体内。 磺胺药在神经、肌肉及脂肪组织中的含量则较低。 磺胺药主要在肝脏代谢,代谢方式有乙酰化、羟基化、结合等,其中以乙酰化为主。 磺胺药乙酰化后失去抗菌作用,且在尿中的溶解度降低,易在肾小管析出结晶,造成对泌尿道的损害。应注意同服碳酸氢钠,并增加饮水,可减少或避免其对泌尿道的损害。 部分磺胺药及代谢产物在肝内成为水溶性的葡萄糖醛酸结合物而失去活性。 排泄 内服难吸收的磺胺药,主要由粪便排出; 内服易吸收的磺胺药主要通过肾脏排泄,通过肾小球滤过或肾小管分泌到达肾小管腔内的药物,有一部分被肾小管重吸收。重吸收少、排泄快的药物如磺胺异恶唑在尿中浓度较高,适用于治疗泌尿道感染。主要由肾小管分泌,重吸收多的药物在尿中浓度低,但在血中有效浓度维持时间较长,多属长效如SMZ、SMM等。 磺胺药尚可经肠液、胆汁分泌排出,也可由乳汁排泄,但量较少。 常见磺胺药 磺胺嘧啶 三甲氧苄啶 磺胺二甲嘧啶 磺胺二甲氧嘧啶 磺胺喹恶啉 磺胺噻唑 巴喹普林 二、样品处理 常用的磺胺类药物,除少数外,一般具有以下的基本结构: 化学性质 本类药物水溶性较低,易溶于极性有机溶剂如乙醇、丙酮、乙腈、氯仿和二氯甲烷,难溶于非极性有机溶剂。 由于磺胺药具有酸碱两性,通过调节溶液的pH值(pH7~9),可以使磺胺药呈不同状态,即中性分子还是离子分子,从而改变水相和有机相的分配系数。 例如,磺胺的中性分子,在二氯甲烷等有机溶剂中分配系数大;离子态分子,则水性溶液中分配系数大。 生物样品通过多次液-液萃取,可达到净化的目的。 1、提取 液体样品(如牛奶)可用水稀释过滤后,荧光直接检测,亦可用水性缓冲液或氯化钠溶液稀释,再进行净化处理。 蜂蜜样品可用水或水性缓冲液稀释。 组织样品(如肌肉、肾脏、肝脏)的预处理相对复杂些,一般采取均质、液-液萃取或固相萃取净化等步骤。 液-液萃取操作烦琐,而蛋白沉淀后直接进样,虽操作简便、并具有较高的回收率,但对色谱柱的损害较为严重。 溶剂提取 溶剂提取时,应尽可能使组织中结合态的残留物溶解,并且除去大部分的蛋白质。 一般可采用酸性水溶液、乙腈、氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮或混合溶剂等极性溶剂进行提取。 二氯甲烷中加入离子对试剂四丁基铵(pH10),对鱼肉和动物组织的提取,发现磺胺二甲氧嘧啶和奥美普林的提取率很高。 另外,提取过程中加入无水硫酸钠可脱去组织样品中的水分,有助于样品的充分提取。 2、净化 初提取液中含大量的内源性干扰杂质,在痕量分析时会干扰组分的测定,因此还需要净化处理。 净化方法有液-液萃取、固相萃取、基质固相分散、在线痕量富集、液相色谱、在线透析和超临界流体萃取等。 有时为了获得高的净化效果,几种方法相结合应用。 三、分析方法 生物样品中磺胺类药物的分析,光谱法(分光光度法、荧光光谱法)和色谱法（薄层色谱、气相色谱、液相色谱、超临界流体色谱）具有灵敏、快速、方便等优点。 例如：分光光度法测定牛组织中的磺胺甲嘧啶，蜂蜜中的磺胺噻唑，奶中的乙酰磺胺、 N-乙酰磺胺二甲嘧啶； 薄层色谱法测定动物组织、猪肝、奶中的磺胺甲嘧啶，蜂蜜中的磺胺噻唑。 1、光谱法 光谱法主要用于样品中个别磺胺类药物的分析,最常用的方法为重氮化-偶合反应分光光度法。 2、薄层色谱法 薄层色谱(TLC)经常作为样品筛选方法。 经薄层色谱分离后的磺胺类药物,可按两种方法进行定量分析：洗脱定量法和薄层扫描定量法。 3、气相色谱法 气相色谱法(GC)具有高的灵敏度和选择性,但由于磺胺类药物难挥发, 测定时需要衍生化。 GC分离柱 磺胺类药物的分离柱可用填充柱和石英毛细管柱,通常毛细管柱(DB-5)分离效果更好。 样品确证分析时,一般用质