第四章 病毒a.ppt

* * * * * * 无胆甾原体L2噬菌体以及芽生噬菌体科的其它噬菌体感染支原体如赖氏支原体（Acholeplasma laidlawii）等病菌 * * * 1.如果大量噬菌体在短时间内吸附于同一细胞上，使细胞壁产生许多小孔，也可引起细胞立即裂解，但并未进行噬菌体的增殖，这种由于超m.o.i的外源噬菌体吸附而引起的、不能产生子代噬菌体的裂解，称为自外裂解（lysis from without）。 * 凡在短时间内能连续完成吸附、侵入、增殖、 装配和裂解5个阶段而实现其繁殖的噬菌体，称为 烈性噬菌体（virulent phage）； 温和噬菌体（temperate phage）： 烈性噬菌体（virulent phage）： 进入菌体后并不进行增殖或引起溶菌，将自己的 基因组整合到宿主基因组上，并随之复制而进行同步 复制，则称之为温和噬菌体（temperate phage）。 噬菌体的两个类型 二、烈性噬菌体的复制周期 裂解性生活周期： DNA噬菌体在宿主细胞内复制后，宿主细胞裂解并释放新噬菌体。（E.coli的T偶数噬菌体 ） 烈性噬菌体的繁殖过程一般分为五个阶段： 即吸附、侵入、复制、装配和释放。 （1）吸附和侵入 受体（吸附）位点：细胞壁上的脂多糖、蛋白质、磷壁酸，以及鞭毛和菌毛。 附着 固着 尾部收缩 刺入细胞 DNA注入 T4噬菌体吸附和侵入宿主细胞过程： （一）双链DNA噬菌体的复制 （T4噬菌体的复制周期） 自外裂解是不能产生子代噬菌体的裂解方式。 如果大量噬菌体在短时间内吸附于同一细胞上，使细胞壁产生许多 小孔，也可引起细胞立即裂解，但并未进行噬菌体的增殖，这种现 象称为自外裂解（lysis from without）。 （2）噬菌体大分子的合成 噬菌体DNA注入宿主细胞后，宿主细胞自身的DNA、RNA和蛋白质的合成便会中止，转而合成病毒复制所需的成分。 通过3个转录阶段增殖 病毒的复制周期示意图 （2）噬菌体大分子的合成 早期mRNA ：宿主RNA聚合酶开始合成的病毒mRNA，即噬菌体DNA复制前转录的mRNA。 早期蛋白：早期mRNA翻译成的蛋白，这些蛋白将接管宿主细胞并合成病毒核酸。其中一些酶将宿主DNA降解成核苷酸，为病毒DNA的合成提供原料；一些蛋白对宿主细胞RNA聚合酶进行修饰，使其识别病毒的DNA启动子，开始转录合成中期mRNA。 中期mRNA：即复制病毒DNA所需的酶的mRNA。 中期蛋白：中期mRNA翻译成的蛋白(DNA复制所需的酶、羟甲基胞嘧啶合成酶以及晚期mRNA聚合酶等)，病毒DNA开始复制(某些碱基的修饰是抵制宿主的限制)。 晚期mRNA： DNA复制完成后合成的mRNA(指导结构蛋白、装配蛋白、溶菌酶等)。 晚期蛋白：噬菌体的结构蛋白、装配蛋白、溶菌酶等这些细胞裂解期间合成的蛋白质。 （3）噬菌体的装配 T4噬菌体的装配是一个极为复杂的自我装配的过程。 大致分为4个独立的途径： 1）头部壳体装入DNA形成成熟的头部 2）由基板、尾管、尾鞘组装成无尾丝的尾部； 3）头部与尾部自发结合； 4）装上尾丝 头部 衣壳粒 DNA 衣壳 尾部 尾鞘 噬菌体 尾丝 （4）噬菌体的释放 37℃培养时，侵染约22分钟后，E. coli发生裂解并释放约300个T4噬菌体。这一过程需要一些T4基因的支持： 一种基因指导溶菌酶的合成，溶菌酶可以攻击细胞壁的肽聚糖； 另一种噬菌体蛋白称为holin，它可破坏细胞膜，使溶菌酶到达并破坏细胞壁，同时阻止细胞膜上的能量代谢反应。 一步生长曲线 1）用噬菌体的稀释液感染高浓度的宿主细胞； 2）数分钟后，加入抗噬菌体的抗血清（中和未吸附的噬菌体）； 3）将上述混合物大量稀释，终止抗血清的作用和防止新释放的噬菌体感染其它细胞； 实验设计依据：1个菌体被1个噬菌体感染,避免二次吸附；细菌群体被噬菌体同步感染。 5）以感染时间为横坐标，病毒的效价为纵坐标，绘制出的病毒特征曲线，即为一步生长曲线。 4）保温培养并定期检测培养物中的噬菌体效价（对噬菌体含量进行计数）； 噬菌体效价--------指噬菌体的浓度，即每毫升样品含噬菌体的个数。 通常是在含敏感菌的平板上形成噬菌斑进行噬菌体的计数，以每毫升中含有的噬菌斑形成单位（plaque forming unit/ml或pfu/ml)表示其效价。 ★噬菌体的效价测定 CFU: colony forming unit/ml 菌落形成单位 以感染时间为横坐标，病毒效