高效液相色谱法测定植物叶片中乙醇酸及几种酮酸含量.PDFVIP

第 33卷 分析化学 ( FENX I HUAXU E) 　研究简报 第 4 期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2005年 4 月 Ch ine se Jou rnal of A nalytical Chem istry 527 ～530 高效液相色谱法测定植物叶片中乙醇酸及几种酮酸含量 1 2 2 1 籍秀梅 　杨 　崇 　杨 　军 　彭新湘 ( 1 2 ) 华南农业大学生命科学学院分子植物生理研究室 ,测试中心 ,广州 510642 摘 　要 　植物组织中的乙醇酸经乙醇酸氧化酶催化生成乙醛酸 , 乙醛酸及其他酮酸类有机酸用苯肼衍生化 反应生成苯腙 。采用 C 柱 、324 nm 紫外检测 , 5% 甲醇 : 95%磷酸缓冲液 ( 13 mmo l/L KH PO ; 1 mmol/L 18 2 4 ) K HPO , pH 6. 0 为流动相 ,可有效分离几种酮酸的苯腙衍生物 。利用该方法可定量测定植物组织中的乙醇 2 4 α 酸 、乙醛酸 、草酰乙酸 、羟基丙酮酸 、酮戊二酸及丙酮酸 。经多方面检验表明 ,此方法精确灵敏 , 回收率高 ,重 复性好 ,并且成本低 、操作简便 。可应用于各种生物材料 、食品、饮料等产品中的上述有机酸含量检测 。 关键词 　反相高效液相色谱 , 乙醇酸 ,酮酸 ,植物 1　引　　言 α 乙醇酸 、乙醛酸 、草酰乙酸 、羟基丙酮酸 、酮戊二酸及丙酮酸等有机酸是植物光呼吸和暗呼吸代谢 中的重要中间产物 ,并且在代谢调控中起关键作用 。植物组织中乙醇酸 、乙醛酸的测定一直采用比色 法 [ 1～4 ] 。但该法的重复性较差 ,专一性不强 ,并且样品在测定之前必须过离子交换柱去除叶绿素等色素 物质 ,此过程容易引起 目的成分的损失 。比色法的操作程序虽简单 ,但要实际掌握到最佳效果并不容 α 易。草酰乙酸 、羟基丙酮酸 、酮戊二酸及丙酮酸等酮酸大多使用酶偶联法测定 。但酶法的成本较高 , 而且一个样品只能测定一种成分 ,造成耗时耗样较多 。Petraru lo等 [ 5, 6 ] 曾用盐酸苯肼衍生化的方法测定 ( ) 尿液中的乙醇酸 。本实验以此方法基本原理为基础 ,并参考比色法测定的经验 衍生化原理二者同 , 通过调整流动相组分 、盐酸苯肼浓度 、衍生反应 pH 等条件 ,最终能有效分离和定量测定上述几种的有 机酸 ,并显著提高了其检测灵敏度及稳定性 。 2　实验部分 2. 1　仪器 、试剂及色谱条件 ( ) ( ) ( W aters5 10 高效液相色谱泵 美国 W aters公司 ; Sh im adzu