预运动训练对局灶缺血大鼠纹状体单胺类神经递质和其代谢产物变化影响.docVIP

预运动训练对局灶缺血大鼠纹状体单胺类神经递质和其代谢产物变化影响 　　摘 要：以纹状体为目标核团，探讨预运动训练改善脑缺血损伤的机制。将雄性Wistar大鼠随机分为安静对照微透析组（CM）、安静对照染色组（CS）、预运动训练微透析组（EM）及预运动训练染色组（ES）（每组10只）。首先在CM及EM组大鼠纹状体内埋植微透析探针导轨，手术恢复后，对EM及ES组大鼠进行为期4周的有氧运动训练。训练结束后，对所有大鼠实施大脑中动脉阻塞手术，并运用微透析-高效液相色谱电化学联用技术对缺血及再灌注过程中大鼠纹状体细胞外液多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NE）及各自代谢产物二羟苯乙酸（DOPAC）、5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）、3-甲基4-羟基苯乙二醇（MHPG）的变化进行观察。CS及ES组大鼠，在大脑中动脉阻塞手术恢复24 h，取脑进行TTC染色。染色结果发现，与CS组相比，ES组大鼠纹状体损伤面积比例显著降低（P 　　1.5 微透析样品的采集 pH值为7.4的人工脑脊液（Artificial cerebrospinal fluid，aCSF），用0.2 μm无菌过滤器过滤。将膜长度为4 mm的透析探针（MAB，瑞典）插入探针导轨，探针与人工脑脊液灌流系统直接相接。采样前开启透析灌流系统，调节恒流泵控制液体流速为2 μL/min。灌流平衡90 min后开始收集透析液，大鼠从局灶缺血手术前30 min到缺血手术过程中及再缺血再灌注120 min期间每隔15 min进行一次采样，每次采样30 μL，透析液经冷冻收集器收集后，置-20 ℃的冰箱中保存待测。 1.6 透析液中DA、5-HT、NE及其代谢产物的检测 DA、5-HT、NE及其代谢产物浓度的检测由库仑阵列电化学高效液相系统完成（Model 5600A CoulArray Detector System，美国惠泽ESA公司）。色谱柱为HR-80 C18反相柱（80×4.6 mm I.D.，3 m，100 ?），检测器为电化学检测器（Model 5600A CoulArray Detector）。流动相配制方法为：一水合柠檬酸13.347 g，二水合柠檬酸三钠17.906 g，EDTA·2Na·2H2O 37.2 mg，八烷基磺酸钠（OSA） 117.15 mg，加入超纯水500 mL左右充分搅拌至溶解，再加入甲醇（色谱纯）100 mL，然后用超纯水定容至1 000 mL。调整pH为4.3。流动相可循环使用一周，但每天必须经0.22 m水系滤膜负压过滤兼脱气处理。仪器参数设置：流速为0.6 mL/min，电化学检测器的信号经记录仪处理后输入计算机，用专用软件（CoulArray for Wingdows?32 applycation software）记录并存储。 1.7 损伤面积的测量 安静对照染色组及预运动训练染色组大鼠在缺血手术完成后将其皮肤缝合，恢复24 h后，测量其脑损伤面积。大鼠经过量麻醉后，实施心脏灌流手术，脑组织被取出后切成2 mm厚度的脑片，然后使用2，3，5—氯化三苯基四氮唑（2，3，4-triphenytetrazolium-chloride，TTC）进行染色。因损伤区脑组织无法着色（仍保持白色），正常脑组织被染成红色。对照大鼠脑立体定位图谱，测量大鼠右侧纹状体损伤面积（由Image-Pro Plus，Media Cybernetics，version 6.0软件完成），其损伤百分比即可通过公式计算出来，计算公式为[10]：[对侧纹状体面积-（同侧纹状体面积-损伤面积）/对侧纹状体面积]×100%。 1.8 数据统计 根据标准曲线计算出每个样品中各种递质及其代谢产物的水平，为避免微透析探针回收率差异，以每只大鼠安静状态下透析液中物质水平为基础值，使用不同时间段样品透析液物质水平与基础水平的比值来反映其变化规律，所有数据均用平均数±标准差（ ±s）表示，应用SPSS 13.0统计软件进行独立样本T检验，P0.05）。二羟苯乙酸（DOPAC）为DA的代谢产物，对其变化进行观察，结果发现，缺血过程中两组大鼠纹状体胞外DOPAC水平均快速下降，后逐渐上升（图2-B）。再灌注时，DOPAC快速上升，后又逐渐下降，但180 min时刻，两组胞外DOPAC仍高于安静水平。对两组变化情况进行进行对比发现，缺血15 min时，预运动训练组大鼠纹状体胞外DOPAC水平显著高于对照组（P0.05）。 2.3 预运动训练对5-HT及其代谢产物变化的影响 如图3所示，对照组与预运动训练组大鼠局灶缺血15 min后纹状体胞外5-HT水平均出现显著升高，在缺血30 min后达最高值，随后逐渐下降，再灌注期间，两组纹状体