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Talen 介绍
新的里程碑:
TALEN靶向基因敲除
北京康为世纪生物技术有限公司
崭新的技术解决经典的挑战
崭新的技术- TALEN
经典的挑战- 基因敲除 (Knockout)
什么是基因敲除- 通过某种方法将一个特定的目标基
因破坏,使其失去原有的功能。
为什么要做基因敲除- 基因敲除是寻找、证明基因功
能过程中的必要步骤之一。
寻找、证明证明一个基因的功能都需要哪些步骤?
科研论证基本法则
科霍法则 (Koch‘s postulates )
如何证明某种微生物导致了某种疾病?
• 该种微生物存在于患病个体而不存在
于健康个体。
• 该种微生物可从患病个体上分离出来
并体外培养。
• 当把该种微生物接种入健康个体体内
Robert Koch 时可使健康个体患病。
1843 – 1910 • 从人为接种的患病个体中又可分离得
到该种微生物。
科研论证基本法则
Falkow的分子科霍法则 (Falkow’s molecular Koch‘s postulates)
如何证明一个基因编码一种毒力因子?
• 该基因存在于毒力菌株,而不存在于无毒菌株。
• 当该基因被敲除时菌株毒力消失或下降。
• 当该基因被补回 (敲除)突变菌株时毒力得到恢
复。
Reverse genetics
为什么要做基因敲除?
• 基因敲除是证明基因功能
不可缺少的逻辑环节
• 基因敲除是基因工程和基
因治疗的重要手段
怎样做基因敲除?
• 经典方法 :自杀质粒,同源重组– 几率低(~1 HR
event per 106 cells ),难 !
• 革命性的进步:RNAi – 临时性,不完全敲除 –
Knockdown
• 饱含希望与失望的技术:ZFN
• 新的里程碑:TALEN
TALEN技术
基于TALEN (transcription activator-like (TAL) effector nucleases)的靶向
基因敲除技术是一种崭新的分子生物学工具,现已应用于细胞、酵母、
斑马鱼与大鼠等各类研究对象。
技术原理:
表达一个重组核酸酶,在靶点识别结构域的作用下,识别靶点核酸序列,
核酸酶发挥内切酶活性,打断目标基因,完成基因敲除的过程。
TALEN 发展过程
• 1989年 植物病原体黄单胞菌属 (Xanthomonas spp. )
avrBs3 基因被克隆。
• 2007年 发现其序列特异性核酸结合特性, avrBs3 – TA
• 2009年 Xanthomonas TA氨基酸序列与核酸靶序列的对应关系被破译
• 由34个aa重复序列组成一个单元,重复17 -18次
• 34个aa中的第12和13个氨基酸 (Repeat Variant Di-residue, RVD)
对应识别一个目标碱基
TALEN 发展过程
TALEN 的最前沿
2011年8月, Nature Biotechnology 上同时发表了用TALEN 技术
进行基因敲除的4篇研究文章,另加一篇综述。
• 一篇人类干细胞
《Genetic engineering of human pluripotent cells using TALE nucleases》
• 一篇大鼠
《Knockout rats generated by embryo microinjection of TAL
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