原代大鼠脑微血管内皮细胞培养方法的改进-首都医科大学.PDFVIP

年 月 首 都 医 科 大 学 学 报 第 卷 第 期 技术与方法 原代大鼠脑微血管内皮细胞培养方法的改进 徐平湘 齐特 陆莉 薛 明肇玉明 首都医科大学基础医学院药理系北京 血脑脊液屏障 是机体的 皮细胞专用培养液 对 内部屏障之一 由介于血循环与脑实质间的软脑膜 脉 培养方法进行优化 并对比了鼠尾胶原与多聚赖氨 络丛的脑毛细血管壁和包于壁外的胶质膜所组成 是 酸作为包被剂下细胞的形态为药代动力学血脑脊液 中枢神经系统的重要解剖结构基础 血脑脊液屏障 屏障模型提供细胞平台 主要是由脑微血管内皮细胞 材料与方法 和周细胞构成 星形胶质足突包绕 毛细血管的外周覆盖其 的表面积 其中 实验动物 血管内皮细胞是构成血脑脊液屏障的关键组织细胞位 只雄性大鼠鼠龄 中国人民解放军 点存在结构复杂的紧密连接且相对缺乏胞饮囊泡及 军事医学科学院实验动物中心提供实验动物许可证 窗孔 其能够阻止大多数内外源性物质透过血脑脊液 号军 屏障的通透性是药物分子发挥其中枢活性的决 药品与试剂 定性因素之一 药物是否能够在上进行有效转运 牛血清白蛋白 购自 是药物进入脑组织和治疗脑部疾病的主要制约 美国公司内皮细胞生长添加剂 因素 青霉素 链霉素 混合液和胎牛血清均购自美国 公司 内皮细胞在血脑脊液屏障中的重要性决定了其 是构建药代动力学血脑脊液屏障体外药物评价模型 培养基及其他培养试剂购自美国 公司 胶 原酶 型购自美国公司胶原酶分散酶及 时的关键因素 目前国内外 模型多采用脑 微血管内皮细胞与星形胶质细胞共培养建立 因此 酶 购自美国公司 内皮细胞培养技术与方法是构建该模型的关键因素 质量分数 鼠尾胶原由本实验室自行提取 之一 目前国内外关于 的分离方法有筛网 质量分数多聚赖氨酸相对分子质量 法 酶消化法及组织块法等 在提取的过程中常常 二甲基噻唑 需要梯度离心法方法繁琐而且由于 二苯基四氮唑溴盐 液为无机溶液会对内皮细胞造成损害影响细胞的 购自美 活性 同时从组织中提取微血管段后培养的包被 国公司 抗体购自美国 剂也会对细胞的活性及形态产生影响 因此 公司稀释比例 抗体购自美国 在组织分离提取及接种的过程中还有优化和改进的