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清喉咽合剂中连翘苷不同定量方法对比研究 　　摘要：目的 对比不同分析方法对清喉咽合剂中连翘苷含量的影响。方法 采用高效液相色谱法（HPLC）和三波长-分光光度计对清喉咽合剂中连翘苷进行含量测定。结果 连翘苷在0.025 1～0.125 6 mg/mL范围内，分别在波长278.5、248.0、272.4 nm处测定吸收度时，ΔA与浓度C之间呈现较好的线性关系，回归方程为ΔA=89.705C-0.041，r=0.999 7；平均加样回收率为97.48%，RSD=1.88%。三波长测定法与HPLC测定结果比较，差异无统计学意义。结论 三波长测定法对供试品制备要求简单，操作简便易行，试验的重复性好，效率高，可以作为该制剂组分含量测定方法。 关键词：三波长-分光光度法；高效液相色谱法；清喉咽合剂；连翘苷 DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.03.025 中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）03-0065-02 连翘为清热解毒药，归肺、心、小肠经，其主要功效为清热解毒、消肿散结、疏散风热，临床上用于痈疽、瘰疬、乳痈、丹毒、风热感冒、温病初起、温热入营、高热烦渴、神昏发斑、热淋涩痛等[1]。在中药制剂中使用较为广泛，主要含有木脂素类（如连翘苷、连翘苷元、连翘酯苷A等）、黄酮类（如芸香苷等）、三萜类（如齐墩果酸、熊果酸、白桦脂酸等）。由于木脂素类化合物热稳定性较差，故在制剂生产过程中很有可能受热分解，故本研究选择清喉咽合剂作为考察对象，对制剂中的连翘苷进行定量评价分析，以对含有此类的中药制剂生产提供参考。 1 仪器与试药 岛津LC2010CHT型高效液相色谱仪（四元泵、在线脱气、自动冷却装置、全自动进样器、紫外检测器），UV-2401PC型紫外可见分光光度计（日本岛津），梅特勒-托利多AB135-S双量程电子天平（瑞士），AS10200ADT型超声波清洗器。 清喉咽合剂（中国人民解放军第155医院院内制剂，批20110408，连翘苷对照品（科翔生物科技有限公司，批号08-2011，经检测纯度大于98%）；色谱甲醇（山东禹王实业有限公司化工分公司，批号20110103061），双重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。 2 溶液制备 2.1 供试品溶液的制备 精密吸取清喉咽合剂2 mL至100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，再精密取5 mL至10 mL容量瓶中，加入蒸馏水稀释至刻度，即得。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取经110 ℃干燥至恒重的连翘苷对照品3.14 mg，置25 mL容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.125 6 mg/mL的连翘苷对照品溶液。 2.3 阴性对照溶液的制备 取与清喉咽合剂处方药材比例相同的中药饮片适量，连翘除外，粉碎过3号筛，取相当量的处方用量于容量瓶中，加入甲醇，按照供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。 3 三波长测定及方法学考察 3.1 三波长的确定 清喉咽合剂中连翘苷的最大吸收波长为278.50 nm，而在此波长处，提取液的其他组分对其有干扰。根据三波长分光光度法测定原理，采用1 cm石英比色皿在波长200～800 nm范围内扫描，绘制供试品、对照品、阴性对照吸收曲线（见图1），采用作图法和计算法确定3个测定波长。 如图1所示，选取连翘苷最大吸收波长278.5 nm为λ1，阴性对照溶液吸收波长248.0 nm为λ2，按作图法粗略找到使阴性干扰的ΔA值为0的λ3为273 nm。按公式ΔA=A2-[（λ3-λ2）A1+（λ2-λ1）A3]/[（λ3-λ2）+（λ2-λ1）][2]，求得使干扰组分ΔA值为0的A3对应的波长λ3，见表1。可知精选λ3为272.4 nm。 3.2 标准曲线的绘制 精密量取0.125 6 mg/mL的连翘苷对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别置于5 mL容量瓶中，加入甲醇使其溶解，摇匀，放至室温，定容，即得。再分别在278.5、248.0、272.4 nm波长处测定吸收度，并扣除甲醇溶液空白，以ΔA和浓度C进行回归计算，得回归方程ΔA=89.705C-0.041，相关系数r=0.999 7，可见，在0.025 1～0.125 6 mg/mL范围内，连翘苷浓度与ΔA有良好的线性关系，可按标准曲线法进行定量分析。 3.3 稳定性试验 按“2.1”项下方法制备供试品溶液并进行稳定性试验，结果表明，样品放置12 h以上，测得其吸光度值不变，表明该供试品溶液在12 h内成分稳定。 3.4 重复性试验