研究生分子免疫学技术.ppt

细胞因子及免疫细胞功能检测方法简介;内 容;一、免疫学检测的基本原理;二、细胞因子检测方法;（二）常规检测方法;1.分子生物学测定法;分子杂交技术;多聚酶链反应技术（PCR）;PCR原理;5’;反转录PCR（Reverse transcription PCR，RT-PCR);RT;RT-PCR反应过程;RT反应体系;PCR反应体系;RT-PCR反应产物检测;实时荧光定量PCR(Fluorescence Quantified real time PCR);（1）原理;1) 常用名词概念;扩增曲线;设定荧光域值;荧光阈值（threshold）;Ct值;Ct值的确定;Ct值与起始模板的关系;（2）常用标记方法;SYBR Green I染料法;SYBR Green I染料法原理;注意事项;结果判定——融解曲线;（3）qPCR结果分析——相对定量解析;1）相对定量的必要性;必须用内对照基因（管家基因）进行校正;2）管家基因筛选;3）分析方法;1）双标准曲线法;优缺点;2） 2 -△ △Ct法;2 -△ △Ct法：假设目的基因、对照基因扩增效率均是100% △Ct（处理前/对照组）=18-17=1 △Ct（处理后/实验组）=16-17.4=-1.4 △ △ Ct= △Ct（处理后）-△Ct（处理前)=-2.4 比率（处理后/处理前）= 2 -△ △Ct=2 - -2.