抗嗜水气单胞菌NJ-1感染地乳酸菌筛选及其免疫调节作用.PDFVIP

第 40 卷 第 3 期 水 产 学 报 Vol. 40, No. 3 2016 年 3 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA Mar., 2016 文章编号: 1000–0615(2016)03–0396–08 DOI: 10.11964/jfc.20150910074 抗嗜水气单胞菌NJ-1感染的乳酸菌筛选及其 免疫调节作用 1 1 2 1 * 王彦波 ， 任真真 ， 张 岩 ， 傅玲琳 (1. 浙江工商大学食品与生物工程学院，浙江省食品微生物技术研究重点实验室，浙江 杭州 310018 ； 2. 河北省食品检验研究院，河北 石家庄 050091) 摘要：为了筛选能提高水产动物对嗜水气单胞菌抗病性的益生菌，并研究其免疫调节的 作用机制。将5种乳酸菌与斑马鱼ZF-4 细胞共培养后通过荧光定量PCR 方法检测细胞因 子NFκB 、TNF-α和IL- 10的表达量，并用流式细胞仪检测被嗜水气单胞菌NJ-1 攻毒后的细 胞凋亡率来筛选对ZF-4 细胞保护性最显著的乳酸菌，将其添加至模式生物斑马鱼饲料中 饲喂28 d后，用嗜水气单胞菌NJ-1 攻毒并检测斑马鱼肠道中促炎性细胞因子TNF-α、IL- 1β 和抗炎性细胞因子IL- 10的表达情况，并计算斑马鱼被攻毒后的累积死亡率。结果显 示，5 种乳酸菌分别与细胞共培养后，芽孢乳酸菌09.712 能明显提高ZF-4 细胞NFκB 、 TNF-α和IL- 10的表达量，攻毒后细胞凋亡率降低至23.36% ，与其他组相比存在显著性差 异，所以选取芽孢乳酸菌09.712用于下一步实验。体内实验显示，攻毒后第1天，与对照 组相比，芽孢乳酸菌09.712 能显著促进斑马鱼肠道内IL- 1β 、TNF-α和IL- 10的表达量，且 随时间变化表达量减少；其中攻毒后第3 天，菌饲喂组IL -1β 表达量比对照组低，而IL- 10表达量明显比对照组高。此外，芽孢乳酸菌09.712 的饲喂显著降低斑马鱼攻毒后的死 亡率。研究表明，芽孢乳酸菌09.712在体外能显著提高对细胞的保护性，在体内能诱导 斑马鱼产生先天免疫应答，提高斑马鱼的免疫力，可作为预防水产动物疾病的理想选 择，也为阐明乳酸菌先天性免疫调节作用提供理论基础。 关键词: 嗜水气单胞菌；乳酸菌；ZF-4细胞系；斑马鱼；免疫调节；细胞因子 中图分类号: S 917.1 文献标志码: A 在水产养殖中，疾病的频繁暴发严重影响并 [5] 菌能显著提高水产动物的免疫力 及其对病原菌 [1] 制约其产量和经济的发展 。长期以来，传统的 [6] 的抗感染能力 。但是，乳酸菌在体内与体外对 消毒剂和抗菌药物等在预防和治疗水生生物疾 机体免疫调节作用的一致性还有待进一步的研究。 病等方面的作用有限，因为