浙江地区强直性脊柱炎患者人白细胞抗原-B27基因亚型地分.docVIP

浙江地区强直性脊柱炎患者人白细胞抗原-B27基因亚型的分布状况及在临床诊断与个体化治疗中的应用 一、立项背景和意义 强直性脊柱炎(Ankylosing spondylitis, AS) 是一种慢性、进行性的自身免疫性疾病，主要累及骶髋关节、脊柱及其四肢，多发生于青壮年，我国患病率达到0.3%，就此推算我国患病人数约为360万。该病致残率高，严重影响人民健康和生活质量，目前临床常规治疗药物是非类固醇类抗炎药（NSAID）、柳氮磺嘧啶（SASP）及甲氨蝶呤（MTX）等，主要用于缓解症状，长期应用可引起诸多副作用。目前多认为AS是在遗传性背景的基础上，免疫学、微生物学等多因素参与的结果，但具体发病机制仍不确切。 从1973年Brewerton和Schlosstein发现AS与人白细胞抗原-B27Programmed death 1,PD-1，CD279）及其配体(PD-L1，CD274，或B7-H1)的相互作用就起到了负向调节的功能。在自身免疫性疾病研究中，网络调节过程中细胞信号通路的程序性细胞死亡因子-1（PD-1）及其配体（PD-L1、PD-L2）介导的免疫抑制反应是目前研究的热点问题。 当前，大多数研究集中在HLA-B27本身在翻译、修饰后的分子结构变化及作为MHCⅠ类分子在抗原肽提呈过程中各种通路的正向调节作用上，对于PD-1与PD-L1的负向调节在HLA-B27基因亚型的表达状况的研究尚未见报道， 因此有必要研究不同HLA-B27基因亚型的第二信号负向调节作用的差异及可能的理论意义和临床价值。 本研究应用PCR-序列特异性引物扩增（PCR-SSP）及测序方法（PCR-SBT）检测AS患者外周血中HLA-B27的基因亚型，分析浙江大部分地区HLA-B27基因不同亚型分布状况及分布差异，探讨发病原因和差异状况。同时采用流式细胞术的方法检测AS患者外周血单个核细胞中PD-1、PD-L1的表达水平，结合临床资料比较AS患者中不同HLA-B27基因亚型的PD-1及其配体的分布状况，观察其差异，有助于临床根据不同基因亚型的AS患者调整免疫治疗方案。 该研究预期能够初步阐明，差异，为临床诊断和个体化治疗提供一定依据。 AS是一种病因、发病机制及免疫病理过程尚不明确的自身免疫性疾病，虽然从发现至今综合了各方面的研究，但进展不大。长期以来，AS的诊断主要建立在骶髂关节影像学检查基础上，缺乏实验室特异性诊断指标，给其早期诊断带来极大困难。1973年发现了HLA-B27与强直性脊柱炎密切相关，继而发现HLA-B27的部分氨基酸序列与志贺菌、克雷伯杆菌等的多肽结构相仿，二者之间存在分子模拟(抗原模拟)而致病。此外，还发现存在其他重要的候选基因和AS相关，包括PD-1、TNF-α、MMP3、IL-7等[2]。因此对AS患者进行HLA-B27基因型。 为止已发现40多个HLA-B27等位基因变异体与AS有关，一般而言HLA-B*2704、HLA-B*2705、HLA-B*2702与AS强相关，HLA-B*2709相关性不强[3-4]。但全世界不同国家和地区对于HLA-B27基因亚型与AS的易感性存在较大差异。其中白种人AS患者与HLA-B*2705、HLA-B*2702有关；HLA-B*2703是黑种人尤其是西非人主要亚型；高加索人种中HLA-B*2705是主要的等位基因；亚洲人种AS患者与HLA-B*2705、HLA-B*2704、HLA-B*2707关联。国内相关报道显示：重庆、广西、湖南、山东、南通地区AS患者以B*2704和B*2705为主要亚型；北京、上海、福建、海南、苏州地区AS患者以B*2704分布这种较为常见的亚型；中国台湾地区以HLA-B*2704与AS的相关最强[5]。浙江西南地区也有对206例强直性脊柱炎的误诊分析，但浙江除了从基因上分析与AS的相关性，另一个重要方面是AS患者细胞因子网络调控的异常。有报道称Fas/FasL的增加导致CD4+T细胞凋亡增加，从而造成了该部分细胞减少，使疾病加重[6]。CD4+调节性T细胞在AS 表达水平偏低，导致诱导免疫耐受机能不足参与了AS免疫发病[7]。目前研究认为，在免疫调控过程中程序性死亡因子-1（PD-1）及其配体的相互作用在自身免疫性疾病中具有重要的意义。 PD-1基因位于染色体2q37.3，长度9.6 KB，属于免疫球蛋白受体超家族，编码一个55 kD的?型跨膜抑制免疫受体，主要负调控T细胞活化和外周耐受[8]。随着分子生物学的发展及其生物芯片等高新技术的出现，PD-1基因多态性可能是影响到自身免疫性疾病易感性的一个遗传因素。一项对韩国人的研究[9]表明PD-1的基因多态性与AS患者易感性有关联。目前国内仅少数PD-1表达水平，本数较少，且未与HLA-B27基因亚型关联性进行分析