细胞培养技术--刘亮课件.pptxVIP

细胞培养简介;细胞培养简介;细胞培养简介;细胞培养实验室安全;安全数据表 (SDS)，又被称为材料安全数据表 (MSDS)，是一种包含某物质各种属性信息的表格。SDS 中包括诸如熔点、沸点和闪点等物理数据、有关该物质毒性、反应性、健康影响、储存和处置的信息，以及应对泼溅的推荐防护设备和措施。 细胞培养实验室的安全设备包括初级屏障，例如：生物安全柜、密闭容器及其他用于消除或尽量减少危险品接触的工程控制设备，以及常与初级屏障配合使用的个人防护设备(PPE)。生物安全柜 (即：细胞培养通风橱) 是最重要的安全设备，可以限制多种微生物学操作产生的感染性泼溅或气体挥发，并可防止您培养的细胞受到污染。 个人防护设备 (PPE) 在人员与危险品之间形成一道直接的屏障，包括用于个人防护的物品，例如：手套、实验室工作服和隔离衣、鞋套、靴子、呼吸器、面罩、防护镜或护目镜。个人防护设备常与生物安全柜及其他可限制所操作物质或材料的装置配合使用。;下列建议仅为实验室安全规范的指导原则，不应将其视为完整的工作准则。 ? 必须始终穿戴适当的个人防护设备。手套污染时应更换，将用过的手套与其他污染的实验室废物一起处置。 ? 操作可能具有危害的物质后以及离开实验室前应洗手。 ? 在实验室内不得进食、饮水、吸烟、处理隐形眼镜、涂抹化妆品或者存放供人食用的食物。 ? 遵守所在机构关于锐器 (即：针头、手术刀、吸管和破裂的玻璃器皿) 安全操作的准则。 ? 小心操作，尽量避免形成气体挥发和/或泼溅。 ? 实验开始前、结束后以及可能具有传染性的物质发生泼溅时，应立即使用适当的去污剂对所有工作台面进行去污。无论实验室设备是否被污染，均应定期进行清洁。 ? 在对可能具有传染性的物质进行处置前应先去除污染。 ? 发生事故可能导致感染性物质暴露时，应向相应人员 (例如：实验室主管、安全员)报告。;细胞培养实验室的具体要求主要取决于开展的研究类型；例如：专业从事癌症研究的哺乳动物细胞培养实验室与从事蛋白质表达工作的昆虫细胞培养实验室的需求相差甚大。但是，所有细胞培养实验室都要求内部没有致病性微生物存在 (即：无菌)，并且均有一些相同的细胞培养必需基本设备。 此部分列出了大多数细胞培养实验室共有的一些设备和用品，以及可使工作更为高效、准确或者可提高检测和分析范围的实用性设备。请注意此列表并非无所不包；任何细胞培养实验室的需求均取决于其所开展的工作类型。;? 细胞培养通风橱 (即：层流通风橱或生物安全柜) ? 培养箱 (推荐使用湿式二氧化碳培养箱) ? 水浴锅 ? 离心机 ? 冰箱和冰柜 (–20°C) ? 细胞计数器 (例如：CountessR 自动细胞计数器或血球计数器) ? 倒置显微镜 ? 液氮 (N2) 冷冻柜或冻存容器 ? 灭菌器 (即：高压灭菌器) ? 抽吸泵 (蠕动泵或真空泵) ? pH 计 ? 共聚焦显微镜 ? 流式细胞仪 ? 细胞培养容器 (例如：培养瓶、培养皿、滚瓶、多孔板) ? 吸管和移液器 ? 注射器和针头 ? 废物容器 ? 培养基、血清和试剂 ? 细胞;细胞培养实验室的主要要求是需要维持细胞培养工作区域处于无菌状态。尽管最好设置独立的组织培养室，在较大的实验室内划出的细胞培养区域同样可用于无菌操作、孵育以及细胞培养物、试剂和培养基的储存。获得无菌条件的最为简单、经济的方式就是使用细胞培养通风橱 (即：生物安全柜)。 细胞培养通风橱可提供无菌工作环境，同时限制多种微生物学操作产生的感染性泼溅或气体挥发。目前已经开发出 I 级、II 级和 III 级三种细胞培养通风橱，以适应不同的研究和临床需要。 细胞培养通风橱的气流性质 细胞培养通风橱通过维持工作区域上方稳定、单向的 HEPA 过滤空气流动，保护工作环境免受灰尘及其他空气污染物污染。气流可以呈水平方向， 与工作台面平行吹过，或者也可呈垂直方向，从通风橱上方吹向工作台面。 根据设计的不同，水平流通风橱可为培养物 (即：空气吹向使用者) 或者使用者 (即：空气由通风橱内的负压经前方吸入) 提供保护。而垂直流通风橱则可同时为使用者和培养的细胞提供良好的保护。;细胞培养通风橱大小应足够一人使用，内部和外部均易于清洁，具有充足的照明，使用舒适，不会导致体位不便。保持细胞培养通风橱内工作空间整洁有序，将所有物品置于直视范围内。向放入细胞培养通风橱内的所有物品喷洒 70% 乙醇，擦拭清洁，进 行消毒。 细胞培养通风橱内物品的摆放一般遵循以下右手使用习惯，并可根据特殊实验中增加的物品进行相应的改动。 ? 在通风橱中部开阔区域放置细胞培养容器 ? 移液器置于右前方易于取用的地方 ? 试剂和培养基置于右后方，便于吸取 ? 试管架置于中后部，用于固定其他试剂 ? 小型容器置于左后部，用于盛放废液;