原创力文档- 3
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- 2017-12-01 发布于湖北
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引物设计： （1)序列应位于高度保守区,与非扩增区无同源序列。 （2）引物长度以15-30 bp为宜（17 1.5×1010bp）。 （3）碱基尽可能随机分布,G+C占50-60%。 （4）引物内部避免形成二级结构。 （5）两引物间避免有互补序列。 （6）引物3’端为关键碱基；5’端无严格限制。 * 总体积 50-100 ?l Buffer 缓冲液 dNTP 原料 Primer 引物（0.1-0.5 ?mol/L） DNA分子 模板 （50-100ng ） Taq酶 DNA聚合酶（0.5-2.5 U/50 ?L ） 反应体系： * 经典循环参数： 94℃ 30s 55 ℃ 45s 72 ℃ 1min 94℃ 5min ×30次 72℃ 7min 4℃ * 用途广泛： 生命学科
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