千斤拔对离体坐骨神经腓肠肌收缩特性的影响本科毕业论文开题报告.docVIP

实验开题报告 研究背景： 千斤拔别名金鸡落地、一条根等，为豆科千斤拔属植物。千斤拔 的根性甘微温，平归肺肾膀胱经，广泛分布于西南中南和东南各省，为西南少数民族的民间民族药物，被广泛使用〔1〕。千斤拔含有分活性成分以黄酮类为主，此外，还含有香豆素类、萜类、挥发油类、脂肪酸类等〔2〕。具有除风利湿、壮腰健肾、活血通络、消瘀解毒多种药理作用〔3〕；用于治疗肝肾阴亏，气血两虚引起的腰膝酸软、肢体麻木、疲倦无力、月经不调诸症均可收到良好效果〔4〕。本实验研究千斤拔水提物对青蛙腓肠肌的抗疲劳作用和对蛙心起搏的影响，为千斤拔在保健食品的开发利用方面提供实验据。 研究思路： 现有的实验研究都是利用千斤拔的提取物对小鼠进行游泳负重的抗疲劳研究，也取得了不错的成果，并且已经达到较为成熟的阶段。说明千斤拔具有抗运动性疲劳的作用，而对于抗运动性疲劳一类药大部分对青蛙的腓肠肌也具有一定的抗疲劳效果，但目前的文献成果还未提及关于千斤拔水提液对青蛙腓肠肌抗疲劳作用的研究。 研究目的： 1、测定千斤拔提取液在不同浸润时间以及不同浸润浓度下的肌肉收缩的阈强度和单收缩的收缩速率、 舒张速率以及收缩幅度等收缩生理指标。 2、探讨分析中药千斤拔对骨骼肌的药理作用。 实验材料： 1.1实验原材料：普通青蛙、千斤拔水煮液（1g/ml） 1.2实验仪器：大剪刀、小剪刀、尖头镊（大）、尖头镊（小）、弯头镊（小）、解剖针、玻璃分针、培养皿、蛙板、锌铜弓、大烧杯、棉线团、大头针、纱布 1.3实验设备：RM6240多道生理信号采集器、BL-420F生物机能实验系统 实验方法： 2.1 千斤拔水提液的制备：取千斤拔的干燥药材，用10 倍体积的去离子水浸泡1 h，加热煮沸1 h，趁热滤取药液；再加8 倍量水，煮沸30 min，合并两次滤液，浓缩至2 g /ml 浓度备用（用时加去离子水稀释至所需浓度）。冷却后以此代替去离子水配制生理盐水,即得高浓度千斤拔水提溶液，用该浓度溶液分别稀释2倍、4倍即得中、低浓度千斤拔水提溶液。 2.2 .1　 腓肠肌标本的制备： 破坏脑和脊髓 取青蛙一只，用纱布包裹青蛙的四肢和躯干，露出头部，用自来水冲洗干净。用左手握住青蛙，用食指压住头部前端使头前俯，拇指按压背部；右手持刺蛙针从枕骨大孔向前刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织，然后将刺蛙针退到枕骨大孔，不拔出而是将其尖转向后平行插入脊柱管中捣毁脊髓，插入椎管时，青蛙后肢立即失去紧张性，多数情况出现尿失禁。若脑脊髓破坏完全，可见青蛙四肢松弛，呼吸消失。 剥皮 自青蛙的两侧腋部以下完全剥离皮肤（注意:可事先剪去尾椎末端及泄殖腔附近皮肤，使剥离更容易）。而后倒提青蛙腿，使其头部向下，用手术剪横向剪开腹部肌肉，看清脊神经后，用粗剪刀剪断脊柱。右手捏住断端边缘皮肤，向下剥去全部后肢皮肤，将标本置于盛有生理盐水的培养皿中。将手和用过的器械洗净后再进行以下步骤 分离两腿 用粗剪刀纵向剪开脊柱（尾扛骨留在一侧)和与后两肢相连的肌肉，再用粗剪刀剪开趾骨联合。将已分离的标本浸入盛有生理盐水的培养皿中。 剪断股骨 取一条腿，先用玻璃粉针沿脊柱侧游离坐骨神经腹腔部，然后用固定针将标本背部认清坐骨固定于干净的蛙板上。用玻璃粉针循股二头肌和半膜肌之间的坐骨神经沟，纵向分离暴露坐骨神经的大腿部分，直至分离至腘窝神经分叉处。然后剪断二头肌、半膜肌和半膜肌肌腱，并绕至前方剪断股四头肌腱。 游离腓肠肌 用玻璃粉针或镊子分离腓肠肌与跟腱，并穿线结扎。在结扎远端用粗剪刀剪断跟腱，左手执线提起腓肠肌，用手术剪剪去其周围组织，但保留腓肠肌起始点与骨的联系。 完成腓肠肌标本 用粗剪刀自膝关节周围向上剪除并刮净所有大腿肌肉，巨膝关节约1cm处剪断股骨。弃去上段股骨，保留部分即为腓肠肌标本。将标本放入盛有生理盐水的培养皿中待用。 标本活性检验 用手术剪轻轻提起标本的脊柱骨片，再用经生理盐水润湿的锌铜弓刺激神经。若腓肠肌迅速发生收缩反应，说明标本机能良好，制备成功。应及时移至盛有生理盐水的培养皿中，供实验所用。 注意事项 在制备肌肉标本的过程中，要不断滴加生理盐水，以防标本干燥，丧失正常活性。 已剥离皮肤的组织避免接触其他不洁物。 3. 分离腓肠肌时，一定要用玻璃分针，不能随便用刀、剪进行操作。 4. 避免用手指或金属器械接触或夹持标本的肌肉部分。 2.2.2 肌肉收缩能力的测定: 分三组进行实验，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别浸润5 min、10 min、15 min三个时间，每组依次用生理盐水(作为阴性对照)高、中、低的千斤拔水提溶液浸润。然后取青蛙的股骨或胫骨头固定在肌槽的固定孔或夹缝内，腓肠肌肌腱上的扎线与张力传感器的应变梁相连，坐骨神经搭在肌槽内的两个金属电极上，电极接头与刺激输出线接通。调节扎