一种基于检测酶反应中间体而测定漆酶活性的动力学分析法.pdfVIP

( ) 第 30 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 　研究报告 第 10 期 　　　　　　　 　 　　 　　　　　　　 　 　　 2002 年 10 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 1187～1191 一种基于检测酶反应中间体而测定 漆酶活性的动力学分析法 黄应平 蔡汝秀 (三峡大学化学系 ,宜昌 443000) (武汉大学化学系 ,武汉 430072) ( ) ( ) ( ) 摘 　要 　在反相胶束 AOTnoctane 介质中 ,漆酶 laccase - 邻苯二胺 ophenylenediamine , OPDA 体系的酶催 ( ) 化反应呈现“超级活性”,并且酶催化反应中间体与产物 2 ,3二氨基吩嗪 2 ,3diaminophenazine , DAP 的吸收光 谱能很好的剥离分开。通过理论推导 ,表明酶催化反应中间体生成的初始速率与漆酶活性存在定量关系 ,采 用初始速率法测定中间体的浓度 ,建立了一种基于检测酶催化反应中间体而测定漆酶活性的动力学分析新 方法。该方法由于在反相胶束介质中采用初始速率法进行测定 ,具有较高的灵敏度和选择性。测定漆酶活性 的线性范围为0～2. 5 U ;检出限为 0. 033 U 。 关键词 　漆酶 ,反相胶束介质 ,酶催化动力学分析 ,分子光谱 1 　引　　言 漆酶活性分析对漆酶的理论与应用研究都具有重要的意义 。如对漆酶激活与抑制机理的研究1 、 非水介质酶学研究等都离不开对漆酶活性的测定。在漆酶应用方面 , 也往往对漆酶的活性要进行测 定2 ,3 。如固定化酶技术的应用 , 尤其是在酶的免疫分析方面。由于漆酶不加 H O 比HRP 实验操作简 2 2 便4 ,并且漆酶抗体标记方法的灵敏度比 HRP抗体标记方法高。因此漆酶活性分析有广阔的应用前 景5 。 以往对漆酶活性的测定一般采用测O 法、催化分光光度或荧光分析法和高效液相色谱法6 。测 2 O2 法灵敏度低 , 操作繁琐 ;高效液相色谱法灵敏度高 , 但仪器较为昂贵 ;酶催化光谱分析法应用较为普 ( ) 遍 , 但一般是在水相中测定其产物的光谱信号变化 , 灵敏度较低。对漆酶邻苯二胺 OPDA 酶催化体 系 , 在反相胶束介质中 ,