全血中组织因子激活的测量方法.docVIP

全血中组织因子激活的测定方法 关键词 组织因子，全血，血栓 摘要 利凝结分子组织因子（TF）的高循环水平与多种疾病，如不稳定性心绞痛、癌症和败血症中的血栓形成有关。目前，临床上还没有一种检验方法能够测定全血中组织因子（TF）激活的水平。本文中，我们提出一种称为组织因子凝血时间（“TiFaCTTM”）的检验方法，该方法可以监测人体血液中纤维蛋白的形成。健康群体的平均基准凝血时间为472±94s（均值±SD，n=150）。Bacterial lipopolysaccharide细菌脂肪多糖（LPS或内毒素）in a time-dependent manner在时间依耐方式上可缩短凝血时间。抗--TF抗体抑制剂可延长LPS-stimulated血液的凝血时间，这表明凝血时间缩短是由于induction of TF expressionTF表达方式的引入。与健康自愿者相比（474±98，n=30），患有不稳定性心绞痛的患者的平均基准凝血时间 (284±86,n=13) 缩短，这表明这些患者的血液循环中TF的水平升高了。TiFaCT检验证明对确定有血栓形成风险的患者血液循环中TF的水平具有临床意义。 介绍 组织因子（TF）是凝结蛋白酶级联中的主要生理起始物质。由TF激活的凝血过程导致凝血酶的形成、血小板的激活和纤维蛋白的沉淀[1-3]。心血管中不合适的TF表达方式可能会导致癌症、抗磷脂综合征、手术、原发性中风、冠状动脉疾病、败血症和损伤的患者形成血栓[4-10]。 尽管TF对这些疾病有显著的作用，但临床上还无测定全血中TF激活水平的方法。以前的研究有测定单核白血球TF抗原的水平提出的fluorescence activated cell sorting（FACS）法或测定分离血浆TF抗原的水平提出的enzyme-linked immunosorbant（ELISA）检验方法[11-15]。然而，由于encryption，TF抗原的水平通常不与TF功能的激活相关[16-17]。因此，单核白血球的分离常常导致它们的激活[18]，在常规的临床检验中是不实用的。 我们提出了一种测量全血中纤维蛋白形成的检验(组织因子凝血时间或“TiFaCT”)。TiFaCT检验是由修正的再钙化(MRT)检测演变形成的[19]。该检验中，所有的血液成分都存在，这是有意义的，因为血小板、淋巴细胞和粒性白细胞可增强单核白血球TF的表达。尽管单核白细胞是血液中TF的主要来源，但是TF也存在于血浆泡囊、癌症患者血液循环中的肿瘤细胞以及多核细胞中[12，14，23-26]。组织因子途径抑制剂（TFPI）可抑制血液中TF的激活[27，28]。因此，TTiFaCT检验测定TF复杂的可能产生的基本的利凝结因素，以及TF激活的内源性抑制剂的平衡。 已报道过与TiFaCT有些相似之处的全血凝血检验方法，如Lee-White凝血时间和其它方法[29-32]。Lee-White凝血时间使用nonsiliconized非硅管玻璃检测试管，该方法在室温下激活内源性凝血途径, 并测量接近成熟的血块的形成。相反，TiFaCT使用siliconized vacutainers的塑料试管，在37℃下最小限度地激活内源性凝血途径，并测量早期的纤维蛋白交联。凝血时间上的巨大差异反映了这两种检验方法上的差别。其它的凝血时间检验表明用内毒素孵育的血液的再钙化时间缩短直接与单核白血球TF表达方式增加相关[29，31]。另一项研究应用两级凝血检验测量了来自全血的膜微粒的TF激活量[30]。 该研究中，我们评价了TiFaCT检验，并阐明了该法有助于确定全血中TF激活的水平。我们确定了健康群体的unstimulated无促进因素和LPS--stimulated有LPS--促进因素的全血的凝血时间的范围。我们也表明了TiFaCT检验对抗凝结素敏感。与健康的自愿者相比，不稳定性心绞痛患者的平均基准凝血时间缩短，这表明这些患者血液中起作用的TF水平升高。 方法 对象 血液供血对象是从La Jolla. California的The Scripps Research Instituded的General Clinical Research Center的“健康正常”的群体中抽取出来的（n=150）。该群体未长期服用药物，并且在血液捐助前20天内未服用非甾体抗炎药（NSAIDS）。该群体的平均年龄为38岁（范围22-74），其中48%为男性，52%为女性，具有种族多样性（68% Caucasion, 17%Hispanic, 9% Asian, 3% African-American and 3% Non-Caucasion not otherwise classified）。为了确定重现性，在Baltimore, Mary