奶牛瘤胃反11油酸氢化细菌分离培养条件的优化.pdfVIP

畜牧兽医学报 ， （ ）： １７１８１７２３ 　 犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪 奶牛瘤胃反 油酸氢化细菌分离培养 １１ 条件的优化 ， １２ ２ ２ ２ ２ ２ ２ 李长皓 ，金 迪 ，王加启 ，赵圣国 ，李 旦 ，卜登攀 ，周凌云 　 　 （ 甘肃农业大学动物科学技术学院，兰州 ； 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 １． ７３００７０ ２． 动物营养学国家重点实验室，北京 １００１９３） 摘 要：本研究旨在建立奶牛瘤胃反 油酸（ ：， ）氢化细菌体外富集和分离培养的优化条件。 １１ 狋狉犪狀狊１１１８１ ＴＶＡ 　 在厌氧培养基中添加 至不同终浓度（、 、 、 、 · －１），接种瘤胃微生物后进行连续培养，每隔 ＴＶＡ ０３０４０５０６０μｇ ｍＬ ４ｈ 采集培养物，用于测定 含量及培养液 值。另外，在厌氧培养基中添加 ，使其终浓度为 · －１， ＴＶＡ ＯＤ ＴＶＡ ５０μｇ ｍＬ 传代培养 代收集每一代富集培养物，利用 分析 氢化细菌种群的变化，并选取 差异条带 ６ ＰＣＲＤＧＧＥ ＴＶＡ ＤＧＧＥ 进行 测序分析。结果，添加 后，连续培养至 ，培养基中 含量快速下降，培养至 ， １６ＳｒＤＮＡ ＴＶＡ ４ｈ ＴＶＡ １２ｈＴＶＡ 浓度保持恒定。当 添加浓度为 和 · －１时，培养 后 降解率较其他浓度要高。此外，培 ＴＶＡ ５０ ６０μｇ ｍＬ １２ｈ ＴＶＡ 养液 值呈先升高后降低的趋势，且在 达最大值。传代富集培养时，当传至第 代时，疑似 氢化菌种 ＯＤ １２ｈ ４ ＴＶＡ 类和数量增加最显著。对差异条带的测序结果表明ＴＶＡ氢化菌大多属于 犔犪犮狋狅犫犪犮犻犾犾狌狊犪狊狊犲狉犻和未培养细菌。 犵 本研究确定了奶牛瘤胃中ＴＶＡ氢化细菌分离培养的适宜 ＴＶＡ添加量、传代时间及富集培养代数，为后续的选择 性分离培养奠定了基础。 关键词：ＴＶＡ氢化细菌；分离培养；条件优化 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｓ８１５．４ Ａ ０３６６６９６４２０１１１２１７１８０６ 　　　　 　　　　 ： 犗 狋犻犿犻狕犪狋犻狅