毕赤酵母表达实务.pptxVIP

毕赤酵母表达实务;Kit Contents;Kit Contents;Clone gene of interest into Pichia expression vector.;There is no yeast origin of replication in any of the Pichia expression vectors included in this kit. His+ transformants can only be isolated if recombination occurs between the plasmid and the Pichia genome.;Clone gene of interest into Pichia expression vector.;Clone gene of interest into Pichia expression vector.;Clone gene of interest into Pichia expression vector.;Clone gene of interest into Pichia expression vector.;Clone gene of interest into Pichia expression vector.; 信号肽; Kozak consensus sequence;Transformation into E. coli ;Transformation of Pichia ;酵母转化的第一步是做线性化，不同的酶可以产生不同的效果，常用的酶主要有以下四个，产生的表型如下：;MUT+和MUTs;几种酵母转化方法的比较;阳性毕赤酵母菌株的筛选;2.Mut+及Muts的筛选 方案一： 1) 用灭菌牙签挑取单克隆，在MM及MD 平板上以一定的方式划线或点HIS+转化子 2) 保先在MM平???上点 3) 每个克隆换一次牙签，点100 个转化子后再继续向下做(约2-3 板) 4) 30 度孵育2 天 5) 两天后，计数平板，寻找在MD 平板正常生长而在MM 平板上生长很小或不长的菌株该菌株为Muts型，其余为Mut+类型。 方案2： 1)用灭菌牙签挑取HIS+转化子单克隆（100个），点至MD 平板上(约2-3 板) 2) 28-30度孵育两天 3) 将MD平板上的克隆转移至新鲜的 MD和MM平板上， 28-30度孵育两天 4) 两天后，计数平板，寻找在MD 平板正常生长而在MM 平板上生长很小或不长的菌株该菌株为Muts型，其余为Mut+类型。 ;多拷贝 重组子的筛选