甘蔗14-3-3基因克隆及表达分析.pdfVIP

南方农业学报 JOURNALOFSOUTHERNAGRICULTURE 2013，44(11)：1757—1764 ISSN 2095—1191；CODEN NNXAAB http：／／www．n~yxb．cn DOI：10．39696：issn．2095-1191．2013．11．1757 甘蔗 4—3—3基因克隆及表达分析 罗炼芳，孔 冉，苏俊波 (中国热带农业科学院 南亚热带作物研究所，广东 湛江 524091) 摘要：【目的】克隆甘蔗j4—3—3基因并预测分析其编码蛋白的结构 ，为研究甘蔗基因功能和代谢调控机制提供参 考。【方法】以水稻j4—3—3基因为模板 ，BLAST甘蔗EST数据库 ，依据序列拼接结果及RT—PcR技术获得编码甘蔗14—3—3 蛋白的全长基因，并用生物信息学方法对该蛋白的二级、高级结构和功能潘陛位点进行预测。【结果 】克隆得到长784 bp的甘蔗j4．3．3基因，最大开放阅读框为771bp，编码256个氨基酸；该蛋 白的分子量与理论等电点分别为28．88kDa和 4．79。蛋 白聚类分析结果表明，甘蔗14．3．3蛋 白与水稻、高粱 、玉米14．3．3蛋白的同源性均在90％以上。Cn3DV．4．1预测 位于第3和第5两个二聚体上的Lys．50、Arg．57、Arg一131和Try一132组成一个凹穴，是结合靶蛋白的作用面；第60、65、 188、218位的4个丝氨酸是磷酸化的活性位点。实时定量PCR检测结果表明，J4．3．3基因在甘蔗不同组织中均有表达 ， 在茎和分生组织中14—3—3基因高丰度表达，可能与糖代谢和细胞分裂的调控相关 ；而在根中可能参与矿物元素的吸 收和代谢。 【结论】甘蔗j4．3．3基因可作为信号转导调控蛋白的候选基因之一。 关键词 ：甘蔗；14—3—3基因；聚类分析；蛋白结构；表达；实时定量PCR 中图分类号 ：$566．1 文献标志码：A 文章编号：2095—1191(2013)11—1757—08 ClloonniinnRgaanndtlex：prreesssslioonnaannaallyyssiiss00fI114-3-3ggeneftrro0I’m Saccharum spp．hybrids LUOLian—fang，KONGRan，SUJun-bo (SouthSubtropicalCropResearchInstitute，ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences，Zhanjiang，Guangdong 524091，China) Abstract：O【bjective】Cloningthe14—3—3geneofsugarcane，analyzingandpredictingitscodingproteinstructure wereconductedtoprovidereferencesforgenefunctionandmetabolicregulatorymechanismstudiesofsugarcane．M【ethod]In thepresentstudy，acDNA encoding14-3-3proteinfrom Saechaurm spp．hybridswasclonedandsequencedbyRT—PCR techniquebasedoncomparingEST sequencesof14—3—3proteinfoundinsugarcane．Thesecondarysturcture，advanced structureandfunctionalactivitysitesof14—3—3proteinwerepredic