氨基酸组成相同序列不同的小分子多肽的液相色谱-质谱联用分析.pdf

中国科学 B 辑 :化学 2009 年 第 39 卷 第 8 期 : 800 ~ 805 SCIENCE IN CHINA PRESS 氨基酸组成相同序列不同的小分子多肽的 液相色谱-质谱联用分析 刘丽红, 陈子林* 武汉大学药学院, 武汉 430072 * 通讯作者, E-mail: chenzl@ 收稿日期：2009-05-22; 接受日期：2009-06-08 摘要 多肽组学是近年来兴起的一门新型学科, 质谱已成为多肽组学研究的强有 关键词 力手段. 然而, 用于检测具有相同氨基酸组成但序列不同的多肽时, 只能给出等同 高效液相色谱 的分子离子峰, 在多肽结构解析上受到一定限制. 因此, 发展色谱分离-质谱检测联 质谱 用技术是分析具有相同氨基酸组成但序列不同的多肽的有效途径. 本文建立了一种 多肽 氨基酸 氨基酸组成相同序列不同的小分子多肽的反相液相色谱分离- 电喷雾离子化质谱检 测新方法. 该方法采用高效液相色谱-质谱联用技术, 以两种三肽 Gly-Ser-Phe 和 Gly-Phe-Ser 为模式样品对象, 考察了小分子多肽在不同流动相组成、流动相添加剂 及pH 等条件下的液相色谱行为, 并讨论其保留机理. 研究结果表明, 在最优化的实 验条件下, 该方法稳定性好, 重现性高, 为多肽组学研究中的多肽解析提供科学的 分析方法. 1 引言 对细胞与组织的一组或几组功能蛋白进行分析确认, 已成为蛋白质组学研究的重要任务. 这项任务也将 随着人类基因组计划的完成, 越来越多的研究 者开始把目光转到蛋白质组学上来, 表明了蛋白组 对研究蛋白质(组) 的相互作用, 以及它们与功能基因 学成为后基因组学中的重要组成部分的地位正在得 (组) 的内在联系具有重要意义. 到加强[1~6] . 一方面, 目前研究数据表明在从功能基 双向凝胶电泳(2D)是目前蛋白质高通量 因(组)找到对应表达的功能蛋白质(组) 时, 虽然基因 分析的最普遍手段[7,8] . 一次双向电泳过程可以分离 组DNA测序结果提供了大量的蛋白质的氨基酸序列 几千甚至上万个蛋白, 但是双向电泳技术仍然存在 数据, 但由于在一些特殊条件下, 信使RNA与蛋白质 许多严重的不足：(1) 憎水性蛋白因难溶于样品缓冲 表达水平的相关性数据不充足, 不能单纯依据信使 液而不能分析, 而高分子量蛋白、极酸和极碱性蛋白 RNA 的数据去预测蛋白质表达水平[3] . 另一方面, 许 易在电泳过程中丢失[9] ; (2) 方法灵敏度和上样量的 多人类重大疾病的发生是由于相关蛋白的差异表达 限制, 低丰度蛋白无法检测[10] ; (3) 重现性依然不能 和翻译后修饰[4] . 找到这种差异蛋白, 使之成为疾病 令人满意, 定量误差大; (4) 步骤繁琐, 费时费力. 因 诊断、治疗及药物筛选的靶分子, 对医学的发展具有 此, 2D已不能满足现代蛋白质组学研究的需要, 重大意义. 因此, 建立一种有效地分离和鉴定技术, 建立新的分离分析方法以弥补 2D的不足 800 中国科学 B 辑: 化学 2009 年 第 39 卷 第 8 期 显得至关重要. 而高效液相色谱的高效分离性能及 为 HPLC 色谱纯, 购自美国