自然杀伤细胞分离培养方法的建立-中华细胞与干细胞杂志.pdfVIP

( ) 2012 11 2 4 Chin J Cell Stem Cell (Electronic Edition), Nov 2012,Vol.2, No.4 中华细胞与干细胞杂志电子版 年 月第 卷第 期 269 •实验研究• 自然杀伤细胞分离、培养方法的建立 朱向情 刘凌 吴琼 陈翠竹 雷力 王强 马丽华 庞荣清 赵晶 何洁 张晓晓 阮光萍 潘兴华 【摘要】 目的 NK 方法 建立自然杀伤细胞（ ）的分离、培养方法，并检测其杀伤活性。 抽取健康人外周血20 ml ，采用淋巴分离液分离单个核细胞，再用苯丙氨酸甲酯（PME ）去 B 3 ~ 5 h 除单核巨噬细胞、 细胞，从而纯化单个核细胞。培养 ，收集黏附于培养板底部表 A-NK 2 面的细胞（即 细胞），重新培养 周。实验过程中用显微镜观察细胞形态，用流式细 MTT 结果 3 胞术检测标志性抗原，用 法检测杀伤率。 单个核细胞在诱导的第 天开始出 7 7 CD3- 96.5 现集落，第 天时集落达到高峰。流式细胞术检测第 天的表面抗原， 为 ﹪， CD3- CD16+ CD56+ 31 MTT 1 4 中 和 双阳性的占 ﹪。 法检测诱导培养的第 天和第 天的 杀伤率，效靶比在20:1 时杀伤率最高分别是(58.86 ± 4.12) ﹪和(54.42 ± 3.02) ﹪；当检测 7 5:1 46.71 ± 3.41) 10 10:1 第 天，效靶比在 时杀伤率最高( ﹪；第 天，效靶比在 时杀伤率最 63.27 ± 3.18) 14 5:1 72.63 ± 2.65) 高( ﹪；检测第 天，效靶比在 的情况下，杀伤率是最高( ﹪。 结论 NK 本实验室通过贴壁和诱导的方法可以快速获得纯度高、杀伤活性强的 细胞。 【关键词】外周血； 自然杀伤细胞； 纯化 The establishment of isolation and culture of NK cell ZHU Xiang-qing, LIU Ling, WU Qiong, CHEN Cui-zhu, LEI Li, WANG Qiang, MA Li-hua, PANG Rong-qing, ZHAO Jing, HE Jie, ZHANG Xiao-xiao, RUAN Guang-ping, PAN Xing-hua. The Research Center of Stem Cel