长爪沙鼠tlr4基因片段克隆及其在脏器中的表达和-应用科学学报.pdfVIP

Online system: 农 业 生 物 技 术 学 报 Journal of Agricultural Biotechnology 2016, 24(10): 1544~1551 DOI: 10.3969/j.issn. 1674-7968.2016.10.011 长爪沙鼠TLR4基因片段克隆及其在脏器中的表达和分布特征 1 1 2 1 1 1* 朱乐欣 蒋小武 刘月环 罗廉佳 李剑 吴旧生 1浙江大学动物科学学院，杭州310058 ；2 浙江省医学科学院，杭州310013 *通讯作者, wujosh@ 摘 要 T TLRs 是参与调节先天免疫的一类具有高度保守性的蛋白受体。 oll 样受体(Toll-like receptors, ) 为克隆长爪沙鼠(Merionesunguiculatus) TLR4基因片段，分析其在内脏组织中的分布特征，本研究通过分 析比较大鼠(Rattusnorvegicus) 、小鼠(Musmusculus)与仓鼠(Mesocricetusauratus) TLR4基因序列，选择保守 区设计引物，扩增长爪沙鼠TLR4基因片段；将所得片段连接到克隆载体上，测序并使用DNASTAR Meglign 软件分析该序列与其他不同种属动物TLR4基因序列同源性；采用半定量PCR 与免疫组织化学 技术分析TLR4在正常长爪沙鼠脏器组织中的表达情况。结果显示，本研究成功克隆了长爪沙鼠TLR4基 因片段(GenBank 登录号: KX137123) ，BLAST 分析比对发现，与其他鼠类的TLR4基因同源性在87.4% 以 上，与仓鼠的同源性较高(89.1%)，与人(Homosapiens) 、猪(Susscrofa) 的TLR4同源性较低，分别为69.5%和 73.1% ，提示长爪沙鼠与仓鼠的亲缘关系较近，与人和猪的亲缘关系较远。半定量PCR 分析结果显示， TLR4基因在长爪沙鼠心、肝、脾、肺和肾中呈差异表达，以肺脏中表达量最高，肝脏中表达量最低。免疫 组化结果表明，在长爪沙鼠的肺脏和脾脏组织中可见较多TLR4阳性反应产物，在肺脏中阳性反应产物主 要见于肺泡支气管上皮细胞；在脾脏中阳性反应产物主要见于脾小结周围的边缘区，淋巴小结内也可见 少量分布；肾脏中偶见阳性反应产物分布，心脏和肝脏上均未检出，这与转录水平结果较一致。研究结果 为探究长爪沙鼠先天免疫及其作为良好的动物感染模型提供了理论依据。 关键词 长爪沙鼠，Toll 样受体4 基因(TLR4) ，克隆，组织分布 中图分类号 S852 文献标识码 A Cloning of TLR4 Gene Fragment and Its Expression and Distribution Characteristic in Organs of Mongolian Gerbil (Merionesunguiculatus) ZHU Le-Xin1 JIANG Xiao-Wu1 LIU Yue-Huan2 LUO Lian-Jia1 LI Jian1 WU Jiu-Sheng1* 1 College of Animal Science, Zhejiang University, Hangzhou 310058, China; 2 Zhejiang Academy of Medical Science, Hangzhou 310013, China *Corresponding author, wujosh@ Abstract Toll- like receptors (TLRs) are highly conservative protein regulators participating in innate immune response. This test aimed to clone and analyse TLR4 gene fragment and distribution in organs of