与菌根真菌共生的兰科福建金线莲差异表达基因的筛选.pdfVIP

中国科学: 生命科学 2012 年 第42 卷 第3 期: 218 ~ 225 SCIENTIA SINICA Vitae SCIENCE CHINA PRESS 论 文 与菌根真菌共生的兰科福建金线莲差异表达基因的 筛选 ①② ① ① ① ①* 李标 , 唐明娟 , 唐坤 , 赵丽芳 , 郭顺星 ① 中国医学科学院药用植物研究所生物技术中心, 北京 100193; ② 重庆邮电大学生物信息学院, 重庆 400065 * 联系人, E-mail: sxguo2006@ 收稿日期: 2011-07-24; 接受日期: 2011-08-21 国家自然科学基金(批准号:和、中国博士后基金(批准号: 20080440328)、重庆市自然科学基金(批准 号: CSTC2008BB5410)和重庆市教委基金(批准号: KJ090504)资助项目 摘要 研究菌根真菌促进药用植物生长发育的分子作用机制在农业上有着十分重要的理 关键词 论意义和实践意义. 本研究从野生福建金线莲(Anoectochilus roxburghii)根中分离出一株内 福建金线莲 兰科菌根共生 生真菌AR-18, 经鉴定为瘤菌属(Epulorhiza sp.)真菌; 将AR-18 菌与福建金线莲组培苗接菌 瘤菌属 培养 60 天, 发现其根中能形成内生菌根并能显著地促进福建金线莲苗的生长. 为从与 差异显示PCR AR-18 菌共生的福建金线莲中分离出差异表达基因, 本实验采用差异显示PCR(DDRT-PCR) 基因筛选 方法, 使用3 条锚定引物和5 条随机引物设计 15 个引物对, 从接菌组和对照组中共分离出 52 条差异显示条带, 其中有9 条带能通过双引物重扩增显现. 再运用反式Northern 点杂交 进一步筛选, 发现其中 5 条上调表达基因, 包括: 编码尿磷酸核苷转移酶基因(UPRTs; EC )和1 条假蛋白基因; 1 条下调表达基因, 编码氨基酸跨膜转运子; 1 条在接菌组中特异 表达基因, 编码突变酶K(matK). 同时, 讨论了上述基因可能的功能, 尤其是UPRTs 基因和 matK 基因与菌根真菌互作的功能. 本研究是福建金线莲植物在该领域的首次报道. 福建金线莲(Anoectochilus roxburghii )是兰科的 金线莲濒临灭绝境地[4]. 在野生状态下, 所有兰科植 一种高位芽植物, 生长在土壤腐殖质较多、光线较 物都与真菌共生[5,6], 野生福建金线莲亦与内生真菌 弱、相对湿度大的阔叶林中[1]. 在中国, 它是被叫做 形成菌根共生关系. 筛选促进福建金线莲生长发育 “金药” 的一种珍稀天然药的原料药植物, 具有保肝、 的益生菌, 研究它们的相互作用具有重大的理论意 防癌、抗氧化、抗炎等多种药理功效[2]. 在中国及其 义, 而且探究其新的繁殖方式有利于保存其野生种 他亚洲国家, 福建金线莲作为一味民间药被广泛用 质资源[7]. 于治疗癌症、心血管、肺部和肝部疾病以及小儿发育 本课题组从野生福建金线莲的根中成功分离出 不良等[3].