血卵涡鞭虫单克隆抗体的制备与初步应用-水产学报.pdfVIP

第 卷第 期 水产学报 年 月 文章编号 血卵涡鞭虫单克隆抗体的制备与初步应用 查智辉 施 慧 许文军 谢建军 孙 忠 浙江省海洋水产研究所浙江海洋学院海洋与渔业研究所浙江 舟山 浙江省海水增养殖重点实验室浙江 舟山 摘要 用血卵涡鞭虫可溶性抗原免疫小鼠经常规融合 间接 方法筛选将 所得阳性克隆再经 次亚克隆后共获得 株针对血卵涡鞭虫的单克隆抗体 单克隆抗体亚类鉴定表明三者为 类抗体 用筛选的杂交瘤细胞株制备小鼠腹 水抗体其细胞上清及腹水效价分别为 和 进一步利用单克隆抗体 建立间接荧光抗体方法对单抗特异性进行鉴定阳性虫体被染上黄绿色荧光而正常梭子 蟹血淋巴则未被染色 用单克隆抗体和多克隆兔抗血清以羊抗鼠 为酶标抗体建 立了检测血卵涡鞭虫的双抗体夹心 方法该方法对血卵涡鞭虫阳性标本检测符合率 为 结果表明制备的单克隆抗体效价高特异性好可用于血卵涡鞭虫的早期临床 诊断 关键词 三疣梭子蟹 血卵涡鞭虫 单克隆抗体 间接荧光抗体法 双抗体夹心 法 中图分类号 文献标识码 血卵涡鞭虫 是近年来危 三疣梭子蟹锯缘青蟹并给沿海经济蟹的养殖造 害 浙 江 省 养 殖 三 疣 梭 子 蟹 成了极大的危害 由于血卵涡鞭虫与蟹类血淋巴 以及锯缘青蟹 的 细胞在形态学上很难区分临床早期感染阶段普 重要病原其宿主范围分布广致病性强流行迅 通显微镜检诊断十分困难加上其生活史特征还 速而且死亡率极高 大部分病蟹具有蟹体消 不是十分清楚 所以对该寄生虫开展更深入细 瘦肌肉白浊蟹盖内充满大量乳白色液体等典型 致的研究是非常必要的 自 年 的临床症状显微镜检发现血淋巴细胞数量急剧 等 建立体外淋巴细胞杂交瘤技术以来抗体技 下降代之以大量的寄生原虫 随着梭子蟹 术在生物医学 自然科学的各个领域获得到了极 和青蟹养殖规模的扩大和集约化程度的不断提 广泛的应用 本研究利用单抗特异性高专一性 高由该寄生原虫引起的病害问题亦日渐突出 强的特点用血卵涡鞭虫营养体阶段虫体制备抗 有关 血 卵 涡 鞭 虫 病 的研 究 国外 自 原免疫小鼠获得抗血卵涡鞭虫的单克 隆抗体以期在血卵涡鞭虫早期诊断和生活史研 等 首次报道法国沿岸血卵涡鞭虫感 究方面找到新的途径 染绿蟹以来其他学者相继报道了挪威龙虾 蓝 蟹 材料与方法 白氏雪蟹 及 主要试剂 蛛