血清血浆-天根生化科技.pdfVIP

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血清血浆-天根生化科技

(DP316)微量样品基因组 DNA提取试剂盒操作指南 ——血清血浆 天根生化科技(北京)有限公司 版本号 实验准备 1. 血清/血浆样本(本实验以血清为例) 2. 无水乙醇 3. 移液器及配套无菌枪头(10 μl,200 μl ,1ml),1.5 ml离心管 4. 涡旋振荡器,金属浴/水浴,台式离心机 实验准备-试剂盒准备 使用前先在漂洗液PW和GD中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。 Carrier RNA储存液的配制 第一次使用Carrier RNA时,请将Carrier RNA (310 µg)溶解在310 µl RNase-Free ddH O中,将 2 溶液分装储存于-20,此时该溶液的浓度为1 µg/ μl ;该储存液应避免反复冻融,冻融次数不能超 过3次。 Step 1 取100 µl -200 µl血清/血浆到2ml的离心管中, 如不足100 µl,加缓冲液GA到100 µl终体积。 Step 2 加入20 µl Proteinase K溶液, 56孵育10 min,并不时摇动样 涡旋混匀,加入200 µl的缓冲液 品。简短离心以去除管盖内壁的 GB ,轻轻颠倒混匀。 液滴。 (如血清/血浆体积50 µl,可加入1 µl Carrier RNA储存液,浓度为1 µg/μl) Step 3 加入200 µl的乙醇(96-100%)。如果 室温超过25,请将乙醇置冰上预冷。 轻轻颠倒混匀样品,室温放置5 min ,简 短离心以去除管盖内壁的液滴。 Step 4 将上一步所得溶液都加到一个吸附柱CR2中 (吸附柱放入收集管中), 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec ,弃废 液,将吸附柱CR2放回收集管中。 Step 5 向吸附柱CR2中加入500 µl缓冲液GD (使用前请 先检查是否已加入无水乙醇), 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec ,弃废液, 将吸附柱CR2放回收集管中。 Step 6 向吸附柱CR2中加入600 µl 漂洗液PW (使用前 请先检查是否已加入无水乙醇), 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec ,弃废液, 将吸附柱CR2放回收集管中。 Step 7 重复操作步骤6。 Step 8 12,000 rpm(~13,400×g )离心2 min ,倒掉废液。 吸附柱CR2室温放置2 min 彻底晾干吸附材料中残余 的漂洗液。 Step 9 将吸附柱CR2转入1.5 ml离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加20-50 μl 洗脱缓冲 液TB ,室温放置2 min ,12,000 rpm(~13,

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