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诸葛菜基因启动子的分离
1997 10 3
Vol. 10 No. 3 Southw st China Journal of Agricultural Sci nc s 1
1) 2)
梁明山 陶 震
利用启动子探针型载体 pSUPV2首次从诸葛菜总 DN A 中克隆了 7 个具有
启动功能 DN A片段。转化E . col i 表明最高卡那霉素 ( kna) 抗性为 140μg /ml, 最
低为 20μg /m。l 含启动子片段 7 个重组质粒分别命名为 pSU PZ1-7。 Southr n印迹
表明 6对 抗性功能来源于诸葛菜 10 、 5 和 3. 9 片段。
pSU PZ Kna kb kb kb
诸葛菜基因启动子 启动子探针型载体 ( pSU PV2) DN A重组
, Ory chop hrag mus violaceus , ,
〔、1 2〕 〔3、4〕
; , 。
DN A,
〔5〕
0. 68% ; 70% 。 ,
〔6、7〕
, 35 ,
NOS S
〔8〕
, , ,
, ,
, 。
1
1. 1
-
1. 1. 1 菌株和质粒 E . coli JM 107, ndA1、 thi-1、 gyr A96、 hsd R17、 λ、 r d A1、
+ g
SU PE44、 r lA 1、 thi△ ( lac- pro)、 F′[traD36、 Pro AB 、 LacI Lac Z△M 15。]
[9 ]
pSU PV 2 。 。
〔10. a〕
1. 1. 2 培养基 LM、 SOB、 SO C
1. 1. 3 Bam H、I Eco R、I HindⅢ、 PstⅠ、 PvuⅡ、 SalⅠ、 Sau3A、I
4
XbaⅠ、 XhoⅠ、 RNas 、 T DN A、 ( CIP) Kl now ,
。 。 。
。
1. 2
1. 2. 1 质粒 DN A 提取 50ml LM 〔 100μg /ml
( ) ] , 37℃。 4000 10, . . ,
Amp rpm Sambrook J
、 , Southr n,
。 。
: 1) 610061
2)
: 1996- 08- 13
2 10
〔10. b〕
DN A。 RNas RN A T E
( 10
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