高亲和力的农药克百威单克隆抗体的制备及鉴定-中国农业科学.pdfVIP

中国农业科学 2007,40(3):518-523 Scientia Agricultura Sinica 高亲和力的农药克百威单克隆抗体的制备及鉴定 杨金易，吴 青，王 弘，潘 科，雷红涛，肖治理，郑晓锋，孙远明 （广东省教育厅食品质量与安全重点实验室／华南农业大学食品质量安全研究所，广州 510642 ） 摘要：【目的】制备高亲和力农药克百威单克隆抗体，建立克百威残留免疫检测方法，控制克百威残留，保 障人民身体健康与保护环境。【方法】合成克百威半抗原BFNB，用人工抗原BFNB－BSA 免疫Balb/c小鼠，取脾细 胞与骨髓瘤细胞在 PEG4000 作用下融合，经间接 ELISA 筛选及显微克隆法亚克隆，分离出阳性细胞株，腹水诱导 法及辛酸－硫酸铵沉淀法大量制备及纯化单克隆抗体，间接 ELISA 法测定抗体滴度及亲和力，间接竞争 ELISA 法 测定抗体特异性。【结果】获得1株稳定分泌抗克百威单克隆抗体的杂交瘤细胞株5D3，其培养上清和腹水抗体滴 度分别为1 ﹕2.048×103 6 9 -1 -1 和1 ﹕1.024×10 ，其抗体亚类为IgG1，亲和力常数为2.54×10 L·mol ，IC 为1.18 ng·ml ， 50 最低检测限为0.01 ng·ml-1 -4 。与克百威降解产物呋喃酚的交叉反应率为4.59×10 ％，另外几种结构类似的氨基甲 酸酯类农药的交叉反应率均小于 3.0×10-4 ％。【结论】此抗克百威的单克隆抗体亲合力高、特异性强，为建立克 百威简便、快速、特异的免疫检测方法奠定了基础。 关键词：克百威；单克隆抗体；免疫化学分析 Production and Identification of High Affinity Monoclonal Antibodies Against Pesticide Carbofuran YANG Jin-yi, WU Qing, WANG Hong, PAN Ke, LEI Hong-tao, XIAO Zhi-li, ZHENG Xiao-feng, SUN Yuan-ming (Key Laboratory of Food Quality and Safety of Education Department of Guangdong Province/Research Institute of Food Quality and Safety, South China Agricultural University ，Guangzhou 510642) Abstract: 【Objective 】The objective of the experiment was to study production of high affinity monoclonal antibodies against pesticide carbofuran, and the developmet of immunochemical assays for health and environmental protection. 【Method 】The hapten 4-[[(2,3-dihydro-2,2-dimethyl-7-benzofuranyloxy) carbonyl]-amino]-butanoic acid (BFN